[發明專利]一種洋蔥成骨肽的提取方法

無效

• 申請號: 201310131843.0
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN103214553A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 張英杰;高勁松
• 申請（專利權）人: 遼寧琦潤生物科技有限公司
• 主分類號: C07K5/037
• 分類號: C07K5/037;C07K1/16;A61P19/10
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：所述方法為采用低溫醇提工藝，制得洋蔥多肽粗提浸膏，將浸膏依次經大孔樹脂色譜法、硅膠色譜法、Sephadex?LH20色譜法分離提純，得到含有洋蔥成骨肽的多肽精提物，再經冷凍干燥制得干粉保存。

2.按照權利要求1所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于，具體步驟為：

A）、取新鮮洋蔥，洗凈、切塊、低溫干燥、粉碎；

B）、對洋蔥粉進行醇提得浸膏；

C）、將浸膏用2～3倍水溶解，然后用與水同體積的有機溶劑萃取2～4次，濃縮水溶液得到洋蔥多肽粗提物1；

D）、將洋蔥多肽粗提物1上大孔樹脂色譜柱后，用50%乙醇洗脫至柱無色，洗脫液減壓回收乙醇得洋蔥多肽粗提物2，其中大孔樹脂為非極性或弱極性聚苯乙烯大孔樹脂；

E）、將洋蔥多肽粗提物2上硅膠色譜柱后，用體積比為CHCL₃：MeOH：H₂O=7:3:0.5的洗脫液梯度洗脫，流速為2～3ml/分鐘，收集薄層色譜紫外光檢測R_f為0.5～0.6的洗脫液，減壓回收洗脫液得洋蔥多肽粗提物3；

F）、將洋蔥多肽粗提物3上Sephadex?LH20凝膠色譜柱，用CH₃OH：H₂O=1:1的洗脫液洗脫，流速為1～2ml/分鐘，收集薄層色譜紫外光檢測R_f為0.55的洗脫液，減壓濃縮得洋蔥多肽精提物，所述Sephadex?LH20為羥丙基葡聚糖凝膠；

G）、洋蔥多肽精提物經冷凍干燥制得干粉保存。

3.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：在操作步驟B～G時溫度低于80℃。

4.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：步驟E和F的薄層色譜條件相同，展開劑是體積比為正丁醇：水：醋酸=4:5:1，顯色劑是5%硫酸乙醇液。

5.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：在步驟C中所用的有機溶劑是乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷中的一種或兩種以上。

6.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：在步驟D中所用的大孔樹脂色譜柱為HPD-100、D-101、AB-8、HP-200或HPD-300。

7.按照權利要求1～6任一所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：所用洋蔥為紫皮洋蔥。

8.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：在醇提時，用與新鮮洋蔥等重量的體積濃度為70～90%的乙醇常溫浸泡2周，減壓回收乙醇得浸膏。

9.按照權利要求2所述洋蔥成骨肽的提取方法，其特征在于：步驟A所述低溫干燥的溫度低于80℃。