[發明專利]一種培育轉基因抗蟲水稻的方法

在審

• 申請號: 201310129273.1
• 申請日: 2013-04-15
• 公開（公告）號: CN104099367A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 林擁軍;陳浩
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/11;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種培育抗螟蟲的轉基因水稻的方法，其特征在于，利用序列表SEQ?ID?NO：16所示的抗蟲基因cry2A構建植物表達載體pBar13-Cry2A，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，通過農桿菌介導的遺傳轉化方法，將所述的表達載體pBar13-Cry2A導入到水稻受體中，使其在轉基因水稻中表達cry2A基因，通過檢測轉基因水稻對水稻螟蟲的抗性，獲得抗螟蟲的轉基因水稻T2A-1。

2.一種植物表達載體pBar13-cry2A，其特征在于，該載體含有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

3.一個水稻復合轉基因結構，其特征在于：在權利要求1所述的轉基因水稻T2A-1的水稻基因組第12染色體上，所述的復合轉基因結構由以下所示的序列沿5’到3’方向順序連接而成：

(i)SEQ?ID?NO：3所示的插入位點5’端側翼序列；

(ii)SEQ?ID?NO：4所示的插入的外源基因序列；和

(iii)SEQ?ID?NO：5所示的插入位點3’端側翼序列。

4.應用權利要求3所述水稻復合轉基因結構的方法，其特征在于培育一種衍生抗蟲水稻的材料，所述衍生水稻材料基因組第12染色體特定位點攜帶有權利要求1所述的由(i)SEQ?ID?NO：3所示的序列，(ii)SEQ?ID?NO：4所示的插入的外源基因序列，和(iii)SEQ?ID?NO：5所示的序列連接而成的復合轉基因結構。

5.一種側翼序列，其特征在于：所述的側翼序列是在轉基因水稻T2A-1的外源基因中插入一個片段，所述的片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

6.一種側翼序列，其特征在于：所述的側翼序列是在轉基因水稻T2A-1的外源基因中插入一個片段，所述的片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。

7.一種轉基因抗蟲水稻5’端側翼序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：PCR反應中的引物對的DNA序列如下所示：

AD5-F1GCAACTCAAGAAGGACTCAATG；

ESP-ubi-RAGGCTGGCATTATCTACTCG。

8.一種轉基因抗蟲水稻3’端側翼序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：PCR反應中的引物對的DNA序列如下所示：

Bar-1F?ACAAGCACGGTCAACTTCC；

T2A-2R?ATGCCAACACGCCCAATC。