[發明專利]一種能與核酸信標發生特異性作用的物質的檢測方法

無效

• 申請號: 201310129229.0
• 申請日: 2013-04-15
• 公開（公告）號: CN103175819A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 劉志洪;曾令瑜;袁云霞;沈佩
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

1.一種能與核酸信標發生特異性作用的物質的檢測方法，以碳納米顆粒為熒光受體，其特征在于：包括以下步驟：?

?1）配制兩組體積相同濃度相同的一端標記過熒光基團的核酸信標的系列標準緩沖溶液；

2）向第一組一端標記過熒光基團的核酸信標的系列標準緩沖溶液中加入體積不同濃度相同的碳納米顆粒溶液，得到體積不同的系列混合標準溶液；向每個混合標準溶液中補加緩沖溶液，使每個混合標準溶液的體積相同，孵育30~60?min；然后對每個混合標準溶液進行熒光檢測，得到熒光猝滅效率最大時所需的碳納米顆粒溶液的體積；

3）以第二組一端標記過熒光基團的核酸信標的系列標準緩沖溶液中的一個標準溶液作為空白溶液不加入待測樣品，其余的標準溶液分別加入相同濃度不同體積的待測樣品，得到體積不同的系列混合待測樣品標準溶液；然后向每個混合待測樣品標準溶液中補加緩沖溶液，使每個混合待測樣品標準溶液的體積相同，孵育20~120?min；向每個混合待測樣品標準溶液中加入與步驟2）中熒光猝滅效率最大時相同體積的碳納米顆粒溶液，得到系列樣品標準溶液，孵育30~60?min，測定每個樣品標準溶液的熒光強度，空白溶液的熒光強度為F0，對每個樣品標準溶液的熒光強度與空白溶液的熒光強度F0的比值和待測樣品的濃度進行標準曲線的繪制；

4）向未知濃度的待測樣品中加入與步驟3）中體積相同濃度相同的一端標記過熒光基團的核酸信標的系列標準緩沖溶液并補加緩沖溶液，得到混合待測樣品溶液，使該混合待測樣品溶液與步驟3）中每個混合待測樣品標準溶液的體積相同，孵育20~120min；加入與步驟3）中相同體積的碳納米顆粒溶液，孵育30~60min后，測定溶液的熒光強度，計算其與步驟3）中空白溶液熒光強度F0的比值，通過標準曲線得到該待測樣品的濃度。

2.根據權利要求1中所述的一種能與核酸信標發生特異性作用的物質的檢測方法，其特征在于：所述碳納米顆粒包括十二烷基苯磺酸鈉穩定的碳納米顆粒或水溶性氧化碳納米顆粒；所述熒光基團包括有機染料或熒光納米顆粒。

3.根據權利要求1所述的一種能與核酸信標發生特異性作用的物質的檢測方法，其特征在于：所述能夠與一端標記過熒光基團的核酸信標發生特異性相互作用的物質包括單鏈核酸或三磷酸腺苷。