[發(fā)明專(zhuān)利]一種H7亞型禽流感病毒單克隆抗體及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310128890.X
• 申請(qǐng)日: 2013-04-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103266088A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳西釗;孫明;張麗;馬永纓;遲立超;秦亞嫚
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)，涉及一種H7亞型禽流感病毒單克隆抗體及試劑盒。

背景技術(shù)

禽流行性感冒（Avian?Influenza，AI）簡(jiǎn)稱(chēng)禽流感，是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的禽類(lèi)傳染病。禽流感病毒（Avian?Influenza?virus，AIV）可感染幾乎所有野禽及家禽，根據(jù)AIV致病力的不同，可將其分為高致病性、低致病性和無(wú)致病性AIV。近年來(lái)，禽流感在世界范圍流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。禽流感病毒極易變異，可跨種傳播感染人類(lèi)，成為威脅人類(lèi)健康的重要病原之一。1997年香港、2003年荷蘭、2004年以來(lái)東南亞都出現(xiàn)了人感染高致病性禽流感而死亡的病例。高致病性禽流感（Hihgly?Pathogenic?Avian?Influenza，HPAI）被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定報(bào)告疫病，我國(guó)也將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。

2009年3至4月，墨西哥爆發(fā)H1N1疫情，導(dǎo)致過(guò)百人感染，其后疫情迅速傳播到全世界。2009年4月30日凌晨，世界衛(wèi)生組織把全球流感大流行警告級(jí)別提高到第5級(jí)。2009年6月11日，世界衛(wèi)生組織將全球流感大流行警告級(jí)別提升至最高等級(jí)第6級(jí)。此次H1N1流感在世界范圍內(nèi)的大流行給全球造成了極大恐慌，影響了全球的正常經(jīng)濟(jì)、貿(mào)易秩序，也給公共衛(wèi)生安全造成極大威脅。盡管我國(guó)目前流行的高致病性禽流感主要是H5亞型，但在我國(guó)河北等地已經(jīng)分離到H7亞型禽流感病毒，與我國(guó)相鄰的朝鮮還出現(xiàn)了H7亞型禽流感流行。所以我國(guó)有必要開(kāi)展H7亞型禽流感病毒的流行病學(xué)檢測(cè)、診斷與防控工作。因此建立檢測(cè)H7亞型高致病性禽流感，以及H7亞型流感病毒的快速、亞型特異性檢測(cè)試劑盒有利于該病的防控，也有助于消除該病對(duì)人類(lèi)健康的威脅。

通常情況下，高致病性禽流感的診斷可以根據(jù)臨床癥狀、大體剖檢等作出初步診斷，具體可參考國(guó)家頒布的《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》。確診和分型則需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，包括：病原的分離與鑒定、血清學(xué)診斷。但是高致病性禽流感需要在生物安全3級(jí)實(shí)驗(yàn)室才能操作，操作人員必須經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)的訓(xùn)練。因此分離和鑒定H7亞型禽流感病毒需要專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)器材、操作技術(shù)，而且需要較長(zhǎng)的時(shí)間，因此該方法的應(yīng)用受到極大的限制。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展與應(yīng)用，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行高致病性禽流感檢測(cè)的方法越來(lái)越多，尤其是基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的反轉(zhuǎn)錄（RT-）PCR，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR。但是該方法需要昂貴且專(zhuān)業(yè)的儀器設(shè)備，尤其是實(shí)時(shí)熒光RT-PCR，所用耗材也價(jià)格不菲，同時(shí)需要經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的人員才能勝任操作，而且容易出現(xiàn)由于樣品污染而造成假陽(yáng)性。HI試驗(yàn)結(jié)果可靠性高，是WHO進(jìn)行全球流感監(jiān)測(cè)采用的方法，應(yīng)用已知亞型的標(biāo)準(zhǔn)抗血清，可以進(jìn)行亞型鑒定，但該方法的缺點(diǎn)是需要除去普遍存在于血清中的非特異凝集素，同時(shí)需要在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行抗原標(biāo)準(zhǔn)化，并需要比較專(zhuān)業(yè)的正確判讀的技能，因此該方法也僅能在相關(guān)的專(zhuān)業(yè)人員中應(yīng)用，不適于普及推廣。而基于抗體的捕獲ELISA、膠體金試紙條、間接免疫熒光技術(shù)、免疫組化等方法可以快速、靈敏地檢測(cè)H7亞型禽流感，適于在大規(guī)模的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)中應(yīng)用和現(xiàn)地檢測(cè)。而捕獲ELISA、膠體金試紙條、間接免疫熒光技術(shù)、免疫組化等方法的應(yīng)用依賴于針對(duì)H7亞型禽流感抗原的特異性單克隆抗體的研制。

但目前為止，尚未有見(jiàn)靈敏度好、特異性強(qiáng)、效價(jià)高的H7亞型禽流感病毒的單克隆抗體和相應(yīng)檢測(cè)試劑盒的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)上述領(lǐng)域的需求和不足，本發(fā)明提供一種靈敏度好、特異性強(qiáng)、效價(jià)高的H7亞型禽流感病毒的單克隆抗體，本發(fā)明單克隆抗體可以應(yīng)用于檢測(cè)H7亞型禽流感病毒或H7亞型禽流感病毒抗體。

一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏號(hào)為CGMCC?No.7308，所述雜交瘤細(xì)胞株的獲得是通過(guò)將H7N2禽流感病毒接種在9日齡受精SPF雞胚上，得到擴(kuò)增后的H7N2株病毒，取活H7N2禽流感病毒滅活，用滅活H7N2禽流感病毒液制備H7N2禽流感病毒抗原純化液，免疫小鼠后，取免疫小鼠脾細(xì)胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，后對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)一步亞克隆，篩選出一株針對(duì)H7亞型禽流感病毒的單克隆抗體，及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，純化并保藏。

一種H7亞型禽流感病毒單克隆抗體，由上述雜交瘤細(xì)胞株分泌而得，該單克隆抗體能特異性的結(jié)合H7亞型禽流感病毒血凝素（HA）蛋白。

上述的單克隆抗體在檢測(cè)H7亞型禽流感病毒或H7亞型禽流感病毒抗體中的應(yīng)用。

一種用于檢測(cè)H7亞型禽流感病毒的反應(yīng)載體，其特征在于，所述反應(yīng)載體直接或間接包被有上述單克隆抗體。