[發明專利]創傷弧菌的實時熒光PCR檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310119375.5
• 申請日: 2013-04-08
• 公開（公告）號: CN103160601A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 曾靜;張蕾;周熙成;魏海燕;張西萌;張琳
• 申請（專利權）人: 北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一組檢測創傷弧菌的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸如序列表SEQ?ID?No.1至序列表SEQ?ID?No.3所示；其中序列SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2分別為檢測創傷弧菌的正義引物和反義引物，序列SEQ?ID?No.3為檢測創傷弧菌的熒光探針。

2.根據權利要求1所述的檢測創傷弧菌的寡核苷酸，其特征在于，所述熒光探針序列SEQ?ID?NO：3的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA。

3.權利要求1或2所述的檢測創傷弧菌的寡核苷酸在制備檢測創傷弧菌試劑盒中的應用。

4.一種創傷弧菌的RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括以下物質：

（1）偶聯有抗創傷弧菌單克隆抗體的免疫磁珠；

（2）RT-PCR反應液，其包括：序列表SEQ?ID?No.1所示的正義引物，序列表SEQ?ID?No.2所示的反義引物，序列表SEQ?ID?No.3所示的熒光探針；

（3）陰性對照；

（4）陽性對照。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述抗創傷弧菌單克隆抗體為保藏編號為CGMCC?No.6755的雜交瘤細胞株分泌產生的創傷弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體。

6.根據權利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR反應液還包括TaqMan?Gene?Expression?Master?Mix溶液。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR反應液中各種成分的使用終濃度為1×TaqMan?Gene?Expression?Master?Mix溶液、0.4μM正義引物、0.4μM反義引物、0.4μM熒光探針。

8.一種創傷弧菌的檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）免疫磁珠富集菌體；

2）提取菌體的DNA；

3）進行RT-PCR反應，其中，使用序列表SEQ?ID?No.1所示的正義引物，序列表SEQ?ID?No.2所示的反義引物，序列表SEQ?ID?No.3所示的熒光探針，所述熒光探針的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA；

4）根據實時熒光RT-PCR反應體系的熒光強度進行結果判定。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，步驟（1）中，所述免疫磁珠為偶聯有抗創傷弧菌單克隆抗體的免疫磁珠。

10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述抗創傷弧菌單克隆抗體為保藏編號為CGMCC?No.6755的雜交瘤細胞株分泌產生的創傷弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體。