[發明專利]同步檢測黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫層析試紙條、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201310115725.0
• 申請日: 2013-04-03
• 公開（公告）號: CN103257230A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 李培武;李鑫;張奇;丁小霞;張文;張兆威
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

技術領域

本發明涉及真菌毒素免疫層析試紙條，具體涉及同步檢測黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫層析試紙條、制備方法及其應用。?

背景技術

黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮是存在于谷物中的有害物質，是由污染谷物的真菌所產生的次級代謝產物。糧食和飼料在收獲過程中未被充分干燥或貯運過程中溫度或濕度過高，都可能為真菌的生長繁殖提供適宜條件，從而引起真菌毒素的污染。黃曲霉毒素能強烈破壞人和動物的肝臟組織，嚴重時會導致肝癌甚至死亡；玉米赤霉烯酮具有類雌激素作用，能造成動物急慢性中毒，引起動物繁殖機能異常甚至死亡，這兩種毒素普遍存在于糧食和飼料中，對人類的健康和安全造成嚴重威脅。鑒于這兩種真菌毒素的危害作用及其在糧食和飼料中的廣泛發生，世界各國糧食和飼料中這兩種真菌毒素的含量進行了嚴格限定。為了加強對糧食和飼料中這些真菌毒素的檢測，保障人們的消費安全，開發針對這些真菌毒素的檢測技術，尤其是快速檢測，是了解和掌握食品及飼料安全衛生信息，增強食品安全消費的重要環節。?

現有的對黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的檢測方法主要包括薄層層析法、精密儀器分析法和免疫學分析法。薄層層析法檢測真菌毒素時，不需要特殊的儀器設備，在一般實驗室都可進行，但檢測試劑用量大、操作繁瑣、其它組分干擾嚴重、準確性差，不能準確定量，且對實驗人員和周圍環境污染危害較大，不適于現場快速檢測，其應用范圍越來越窄。精密儀器分析法包括高效液相色譜法、液相色譜與質譜及串聯質譜聯用的方法，其靈敏度高，準確性好，但儀器昂貴，要求所檢測的樣品的純化程度高，樣品前處理過程繁瑣，耗時長，對實驗環境和檢測人員要求高，難以實現快速檢測，檢測成本高，不適用于現場快速檢測。免疫分析方法克服了薄層層析法和儀器分析法的缺點，由于其特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、成本低、對實驗人員和周圍環境的污染危害小、適于現場批量檢測等優點在近年來獲得了快速發展。基于膠體金標記抗體與抗原特異性結合反應的免疫層析技術由于其檢測結果肉眼可見，不需要大型儀器設備，檢測成本低，分析時間短，近年來在真菌毒素等微量殘留物的定性、在線、快速檢測上得到了廣泛應用。然而現有的用于真菌毒素檢測的膠體金免疫層析試紙條大都只能檢測一種真菌毒素。而我國小農戶分散型的種植方式，農產品中真菌?毒素發生率高，且同一農產品受多種真菌毒素污染的可能性大，因此迫切需要能同步檢測多種真菌毒素的檢測技術，以實現對糧食及飼料等中真菌毒素混合污染的同步、快速監測。?

發明內容

本發明所要解決的問題是提供一種同步檢測黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫層析試紙條、制備方法及其應用。該免疫層析試紙條可用于樣品中黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮兩種真菌毒素含量的同步檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。?

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案為：?

同步檢測黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫層析試紙條（見圖1和圖2），包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上設有橫向質控線和檢測線，所述檢測線位于質控線的下方，個數為兩條，呈間隔分布，所述兩條檢測線上分別包被有玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶聯物(ZEA-BSA)和黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物(AFB1-BSA)，所述質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體和納米金標記的抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體；所述抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體由保藏編號為CCTCC?NO.?C201013的雜交瘤細胞株1C11分泌產生，抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體由保藏編號為CCTCC?NO.?C201328的雜交瘤細胞株2D3分泌產生；該雜交瘤細胞株2D3已于2013年3月7日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO.?C201328。

按上述方案，所述的吸水墊長16～18mm，寬3～4mm，檢測墊長18～30mm，寬3～4mm；金標墊長10～12mm，寬3～4mm；樣品墊長12～15mm，寬3～4mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm。?

按上述方案，所述的吸水墊為吸水紙。?

按上述方案，所述檢測墊上兩條檢測線之間的間距為2-4mm，靠近質控線的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15～20mm，所述靠近質控線的檢測線與質控線的間距為5～7mm。?