[發(fā)明專利]動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血清miRNA標(biāo)志物組及其特異引物與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310112998.X
• 申請(qǐng)日: 2013-04-02
• 公開（公告）號(hào): CN103160588A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血清miRNA標(biāo)志物組及其特異引物與應(yīng)用，屬于醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

心血管病嚴(yán)重危害人類健康，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)心血管病已成為全球范圍第一位的死亡原因。我國心血管病的流行趨勢(shì)與全球完全相符，到2006年已占全國總死亡人數(shù)的1/3,是危害城鄉(xiāng)居民健康的頭號(hào)殺手，每年主要用于心血管病的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)1300億人民幣，心血管病已成為制約我國社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要因素之一。動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是大部分心血管病的病理學(xué)基礎(chǔ)，是心血管疾病致殘致死的主要原因,目前研究的共識(shí)是動(dòng)脈粥樣硬化生物標(biāo)記物(Biomarker)和心血管病明顯相關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化是一種涉及多種病因和多種生理、生化和病理變化的慢性復(fù)雜疾病。合適的生物標(biāo)記物可為心血管疾病的分子診斷提供重要的線索和依據(jù)，促進(jìn)早期診斷和個(gè)體化治療目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)。

目前大部分動(dòng)脈粥樣硬化生物標(biāo)記物是血液中特定表達(dá)的蛋白。其中傳統(tǒng)標(biāo)記物如總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)；C-反應(yīng)蛋白(C-reactive?protein,CRP)是近十年研究最多的動(dòng)脈粥樣硬化生物標(biāo)記物，主要由肝細(xì)胞在感染、損傷等條件下受IL-6誘導(dǎo)合成,在Ca²⁺存在下CRP與受損細(xì)胞結(jié)合，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成；此外單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocyte?chemoattractant?protein-1,MCP-1)屬于趨化因子,動(dòng)物模型研究表明MCP-1具有促動(dòng)脈形成作用，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中大量表達(dá)，抑制MCP-1活性可減少斑塊的形成；其它如妊娠相關(guān)血漿蛋白A(pregnancy?associated?plasma?protein?A,PAPPA)是一種由合胞體滋養(yǎng)層合成的糖蛋白(>200kDa)，傳統(tǒng)上用于妊娠期間Down氏綜合征篩查，PAPPA可能導(dǎo)致完整的粥樣硬化保護(hù)帽破裂，其濃度升高與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)；近期研究發(fā)現(xiàn)軟骨糖蛋白YKL-40濃度水平升高也與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)。但是上述動(dòng)脈粥樣硬化標(biāo)記物都有一定的局限性，主要由于蛋白質(zhì)翻譯后修飾呈多樣化、豐度相對(duì)較低。近年來外周循環(huán)血液檢測(cè)到的microRNA被逐步確定具有很好的疾病分子標(biāo)志物的潛能。

microRNA（微RNA，miRNA）是細(xì)胞內(nèi)一類在進(jìn)化上高度保守，長度約為22個(gè)核苷酸的非編碼RNA的基因產(chǎn)物。miRNA來源于細(xì)胞內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄體，以單鏈形式存在，通過與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，導(dǎo)致mRNA的降解或翻譯抑制。研究表明miRNA參與包括細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞分化、發(fā)育和逆境應(yīng)答等多種生物學(xué)過程，因此人體的眾多生命活動(dòng)和疾病的發(fā)生發(fā)展都與miRNA的變化密不可分。近年的研究進(jìn)一步證實(shí)miRNA不僅在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)體生理病理進(jìn)程，而且還存在于體液中，如血清、血漿、腦脊液等。其中外周血中存在幾百種的miRNA，這些小分子RNA性質(zhì)穩(wěn)定、含量豐富、易于定量檢測(cè)，且存在疾病特異性。許多心血管疾病以一種或幾種miRNA表達(dá)異常為特征，對(duì)于疾病的早期診斷和鑒別診斷都有重要作用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)來自外周血循環(huán)miRNA表達(dá)水平和一系列心血管疾病有著密不可分的關(guān)系。比如循環(huán)中心肌細(xì)胞來源的miRNAs可以作為心肌梗死的潛在生物標(biāo)記物。在急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃突颊叩难獫{中，心臟特異性表達(dá)的miR-208a在急性心梗癥狀發(fā)生前4小時(shí)內(nèi)即顯著升高。對(duì)急性心梗的診斷具有較高的敏感性和特異性。Mamoru?Satoh等對(duì)擴(kuò)張型心肌?。―CM）病人心內(nèi)膜進(jìn)行活檢，發(fā)現(xiàn)與正常人群相比，DCM患者心內(nèi)膜miR-208水平顯著上調(diào)，長時(shí)間隨訪證實(shí)miR-208水平可以有效預(yù)測(cè)臨床結(jié)局，提示miR-208與DCM的發(fā)病進(jìn)程相關(guān)性強(qiáng)。Tijsen等最初利用miRNA芯片挑選出16種在心衰患者特異表達(dá)的miRNA，而后的評(píng)價(jià)中表明miR－423可以作為心衰的生物標(biāo)記物。Fukushima報(bào)道m(xù)iR-126與心衰的嚴(yán)重程度相關(guān)，可以作為心衰的潛在生物標(biāo)記物。由于miRNA的變化早于基因和蛋白的改變，也早于疾病癥狀的出現(xiàn)，由此檢測(cè)外周血循環(huán)miRNA的動(dòng)態(tài)變化，有可能為動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展提供線索，進(jìn)而可以指導(dǎo)臨床進(jìn)行早期診斷，有效控制疾病的發(fā)展。利用外周血循環(huán)miRNA作為動(dòng)脈粥樣硬化早期診斷分子標(biāo)記物的方法比傳統(tǒng)的特異蛋白分子檢測(cè)方法將更加有效。