[發明專利]甲狀腺激素受體α基因作為山羊生長性狀遺傳標記及應用

有效

• 申請號: 201310111237.2
• 申請日: 2013-04-02
• 公開（公告）號: CN104099336A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 王林杰;張紅平;李利;仲濤;王艷;薛科;周中強
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/68
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技術領域

本發明屬于山羊的分子標記制備技術領域，主要為山羊TRα基因的克隆和作為分子標記輔助選擇，即利用位于該基因第6內含子中的C230T變異位點來預測山羊不同基因型個體的生長性狀。

背景技術

傳統的家畜育種是根據一些表型性狀進行選擇，但這些表型性狀是由遺傳基因和外界環境共同決定的，因此傳統育種在許多優良性狀的育種上不能起到決定性作用。另外，某些性狀需要在性成熟或生長后進行測量，需要較長的周期。利用分子遺傳學方法，如SNP標記和微衛星標記等方法可以從本質上改變性狀，克服傳統育種的不足。分子遺傳學方法能在早期獲得數據，有利于縮短遺傳間隔；還可以通過基因的突變進行直接選擇，提高選擇的準確性。分子標記輔助選擇前提是要找到對性狀有較大遺傳貢獻率的主效基因或標記，通過對這些主效基因和標記的檢測和選擇決定育種方向。目前已發現許多這類與生產性狀密切相關的主效基因和分子標記，將此類標記與傳統育種結合可增進家畜育種進程。

甲狀腺激素TH?(Thyroid?Hormone）由甲狀腺分泌，有著廣泛的生物學作用，能調節生物體的生長、發育、代謝?(Yen?2001)。該激素有兩種形式：四碘甲腺原氨酸?(T4)以及三碘甲腺原氨酸?(T3)。血液中T4占98%，T3占2%?(St?Germain,?Galton?et?al.?2009),但T3的生物活性約是T4的5倍，因此主要是T3發揮激素的作用?(Therien?and?Blostein?2000)。甲狀腺素參與調節機體的基礎代謝，調節體溫，使機體能更好的適應外界環境，增強動物的耐受性(Yen?2001)。甲狀腺激素能促進蛋白質和酶的生成,還能減少脂肪貯存，降低血脂濃度，促進膽固醇的降解，增強小腸粘膜對葡萄糖和半乳糖的吸收，促進糖原的合成?(Pearce?2012)。

甲狀腺激素必須與其受體結合才能作用于靶細胞。甲狀腺激素受體TR?(Thyroid?Hormone?receptor)基因編碼一個410個氨基酸的類固醇蛋白，屬于類固醇受體超家族。TR分子有三個功能結構區：羧基端為其與激素、配體等蛋白的結合區；氨基端具有轉錄激活功能，并能與相應抗體結合；DNA結合功能區介于前兩者間，是最保守的區域。TR的激素反應原件HRE?(hormone?responsive?element)能結合在特定的DNA序列（甲狀腺激素反應原件）上調或抑制基因的表達?(Power,?Llewellyn?et?al.?2001)；未結合甲狀腺激素的TR與DNA結合，起抑制作用，當結合甲狀腺激素后構象改變，激活靶基因的轉錄。TR基因主要包含TRα和TRβ基因兩種，分別編碼TRα和TRβ蛋白?(O'Shea?and?Williams?2002)，這兩種蛋白的結構主要在于氨基端的氨基酸結構不同。由于TRα和TRβ基因的選擇性剪切或轉錄起始位置的不同而產生若干亞型?(Shibusawa,?Hollenberg?et?al.?2003)。TRα的亞型主要作用為調節機體生長發育，維持甲狀腺的功能?(Lazar?1993)；TRβ的亞型主要作用為增加對T3的敏感性，維持TH對促甲狀腺激素TSH?（thyroid?stimulating?hormone）的負反饋?(Jones,?Srinivas?et?al.?2003)。

甲狀腺激素受體協助甲狀腺素發揮廣泛的作用。目前，在人、小鼠、魚類等物種上已有報道關于甲狀腺激素受體基因結構，多態性等。Helena等的研究結果發現在人TRα基因的第2外顯子、第3內含子、第5外顯子、第8內含子、第9外顯子的3’UTR區、第10外顯子的3’UTR區處發現了SNPs?(Sorensen,?van?der?Deure?et?al.?2008)，但是在山羊上還未見TRα基因多態性的報道。

發明內容

本發明的目的在于克隆與山羊生長性狀相關的TRα基因片段，尋找基因突變位點，并建立相應的多態性檢測方法進行性狀關聯分析，為山羊的標記輔助選擇提供一種有用的分子標記。

??本發明通過以下技術實現：

??一種作為分子標記應用的與山羊生長性狀相關的TRα基因片段，全長為888bp，它的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：1所述。其中第154bp處有一個C230-T230的堿基突變，導致NdeI?PCR-RFLP多態性。

一種制備所述的與山羊生長性狀相關的TRα基因片段的方法，按照以下步驟：