[發(fā)明專利]沙門氏菌及其五種血清型的多重PCR鑒定試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310110380.X | 申請日： | 2013-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN104087654A | 公開（公告）日： | 2014-10-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳聰明;汪洋;李瑞超;沈建忠 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢 |
| 地址： | 100094 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 沙門氏菌 及其 血清 多重 pcr 鑒定 試劑盒 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種沙門氏菌及其五種血清型的多重PCR鑒定試劑盒。
背景技術(shù)
沙門氏菌作為重要的病原微生物之一，可以通過食物傳播給人類，造成胃腸炎、敗血癥等癥狀，已經(jīng)成為全世界范圍內(nèi)重要的食源性病原微生物。生化鑒定和血清學分型是研究沙門氏菌病流行病學的常用方法，由于沙門氏菌有2600多種血清型，常規(guī)血清學分型需要大量的診斷血清、熟練的技術(shù)人員和繁瑣的操作步驟，由于粗糙型菌和單相菌的存在，導致常規(guī)血清學分型對部分沙門氏菌無法準確分型。因此，更加簡單、準確、快速的鑒定方法在實踐中具有重要的意義。目前，鼠傷寒、腸炎、阿貢那、豬霍亂和雞白痢沙門氏菌作為常見的沙門氏菌，建立快速對其進行鑒定的方法在流行病學調(diào)查和臨床診斷實踐中至關(guān)重要。
多重PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上改進而來，即在一個PCR反應體系中，通過添加多對引物，對多個靶點序列進行擴增、檢測，其反應原理、試劑組成和操作過程與常規(guī)PCR一致，具有更加高效、經(jīng)濟的特點。
通過對已有文獻的檢索發(fā)現(xiàn)，目前對沙門氏菌的PCR鑒定有兩種思路：一是針對每個血清型的特異性片段，設(shè)計引物進行鑒定；二是針對O抗原和H抗原的編碼相關(guān)基因，設(shè)計引物進行鑒定。劉斌等人（2012）在《Food?Control》雜志發(fā)表了《Development?of?a?novel?multiplex?PCR?assay?for?the?identification?of?Salmonella?enterica?Typhimurium?and?Enteritidis》，針對鼠傷寒和腸炎沙門氏菌的特異性片段設(shè)計出引物，對其進行鑒定，由于僅僅能夠鑒定兩種血清型，具有一定的局限性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種檢測或輔助檢測沙門氏菌或其五種血清型的引物組。
本發(fā)明提供的引物組，由引物對1、引物對2、引物對3、引物對4、引物對5和引物對6組成；
所述引物對1由序列表中序列7所示的單鏈DNA分子和序列表中序列8所示的單鏈DNA分子組成；
所述引物對2由序列表中序列9所示的單鏈DNA分子和序列表中序列10所示的單鏈DNA分子組成；
所述引物對3由序列表中序列11所示的單鏈DNA分子和序列表中序列12所示的單鏈DNA分子組成；
所述引物對4由序列表中序列13所示的單鏈DNA分子和序列表中序列14所示的單鏈DNA分子組成；
所述引物對5由序列表中序列15所示的單鏈DNA分子和序列表中序列16所示的單鏈DNA分子組成；
所述引物對6由序列表中序列17所示的單鏈DNA分子和序列表中序列18所示的單鏈DNA分子組成。
上述引物組中，所述引物組中各條引物之比為等摩爾比；
所述沙門氏菌五種血清型為鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、阿貢那沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測或輔助檢測沙門氏菌或其五種血清型的PCR試劑。
本發(fā)明提供的PCR試劑，由上述的引物組、PCR緩沖液和水組成；
上述PCR緩沖液為Premix?Ex?TaqTM?Version2.0(Loading?dye?mix)，購自TaKaRa，D335A；含有Taq酶、dNTP、Mg2+、Loading?buffer；其中，Taq酶在反應體系中的量為0.5U、各種dNTP在反應體系中的終濃度均為0.2mM、Mg2+在反應體系中的終濃度為2mM。
所述引物組中的各條引物在所述PCR試劑中的終濃度均為0.1μM；
所述沙門氏菌五種血清型具體為鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、阿貢那沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。
上述水為無菌水。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種檢測或輔助檢測沙門氏菌或其五種血清型的PCR試劑盒。
本發(fā)明提供的試劑盒，包括上述的引物組或上述PCR試劑；所述沙門氏菌五種血清型具體為鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、阿貢那沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。
上述的引物組或上述PCR試劑在制備檢測和/或輔助檢測待測細菌是否為沙門氏菌產(chǎn)品中的應用；
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