[發明專利]新型多肽、水解抗菌肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201310108061.5
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN103194442A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 沈克飛;鄭華;曹蘭;徐登峰;付利芝;楊睿;王孝友
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/00;C12P21/06
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 秦力軍

1.編碼新型多肽的核苷酸序列，其特征在于，如SEQ?ID?NO：1所示。

2.含有權利要求1所述的核苷酸序列的重組載體。

3.根據權利要求2所述的重組載體，其特征在于，在所述核苷酸序列的5’端引入BamHI位點，且在3’端引入XhoI位點，BamHI和XhoI位點酶切后得酶切片段，同時對pGEX-4T-1上述位點進行酶切后，連接所述酶切片段和酶切后的pGEX-4T-1連接，得重組載體。

4.權利要求2所述重組載體制備的重組菌株。

5.權利要求1所述的核苷酸序列編碼的新型多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

6.權利要求5所述的新型多肽的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

A新型多肽基因的合成及表達載體構建

將如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列的編碼序列5’和3’端引入BamHI和XhoI酶切位點，與pGEX-4T-1分別進行酶切后再連接構建重組質粒，并轉化到BL21，構建重組菌株；

B誘導表達

步驟A所得重組菌株單菌落擴大培養，加入IPTG誘導后，37℃、180r/m振搖培養5h，4℃、12000r/m離心10min收集菌體，按每100ml培養液加入20ml?PBS重懸沉淀，得新型多肽。

7.根據權利要求6所述的新型多肽的制備方法，其特征在于：步驟A所得重組菌株抗性培養至富集后，收集菌體，所述菌體中含有所述新型多肽。

8.權利要求5所述的新型多肽的制劑，其特征在于，所述制劑為水解后的所述新型多肽，即水解抗菌肽。

9.權利要求8所述的制劑的制備方法，其特征在于，在所述抗菌肽中調節pH值至1.5-2.0，加入胃蛋白酶至充分水解，并調節pH至中性，離心后收集上清液；上清液經微濾、噴霧干燥或凍干，即為水解抗菌肽。