[發(fā)明專利]一種聚合物微球及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310105927.7
• 申請(qǐng)日: 2013-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN104072678B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗華;劉鍵熙;楊開廣;曲焱焱;張玉奎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C08F267/10
• 分類號(hào): C08F267/10;C08F222/38;C08F220/58;C08F220/06;B01J20/26;B01D15/08;G01N1/28;G01N1/40;C07K1/14;C12N9/08
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司21002
• 代理人: 馬馳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及富集糖蛋白，具體地說(shuō)是一種單分散核殼結(jié)構(gòu)聚合物納米粒子及其制備和在糖蛋白富集中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著人類基因組測(cè)序的結(jié)束，蛋白質(zhì)組學(xué)逐漸成為大家關(guān)注的焦點(diǎn)。眾所周知，蛋白質(zhì)的組成在生物體內(nèi)是極其復(fù)雜并且不斷變化，即使在相同物種的不同細(xì)胞或是相同細(xì)胞的不同時(shí)期，蛋白質(zhì)的組成都存在顯著差異。在這些蛋白中，翻譯后修飾蛋白往往因其低豐度及復(fù)雜性而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

糖蛋白作為一類重要的翻譯后修飾蛋白，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫及腫瘤發(fā)生等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。因此，糖蛋白和糖肽的發(fā)現(xiàn)與鑒定在疾病的診斷和蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域意義重大。在眾多方法中，質(zhì)譜技術(shù)已成為研究糖蛋白糖基化位點(diǎn)信息及糖型結(jié)構(gòu)歸屬的有效工具，但由于糖蛋白豐度低、糖肽占總肽段比例小，分析檢測(cè)時(shí)往往被高豐度的非糖肽掩蓋，因此在分析之前，需要對(duì)糖蛋白/糖肽進(jìn)行選擇性富集。

目前最常用的糖蛋白富集方法包括凝集素親和色譜，酰肼及硼酸功能化材料等。對(duì)于具有1,2-順式二醇化學(xué)結(jié)構(gòu)的糖型，苯硼酸可以與其形成可逆的五元或者六元環(huán)的酯。此方法步驟簡(jiǎn)便快捷，避免了糖鏈結(jié)構(gòu)的破壞，且富集產(chǎn)物與質(zhì)譜兼容。因此，苯硼酸在糖肽和糖蛋白的選擇性富集領(lǐng)域受到了人們的關(guān)注。目前，在利用苯硼酸功能化基團(tuán)對(duì)糖蛋白富集的材料中，使用較為廣泛的是氨基苯硼酸和硫基苯硼酸。目前主要是利用這些功能分子上的氨基和硫基與基質(zhì)材料上的基團(tuán)反應(yīng)，將苯硼酸功能化基團(tuán)接枝在基質(zhì)材料的表面（X?Zhang,X?He,L?Chen,Y?Zhang,J.Mater.Chem.2012,22,16520–16526;L?Liang,Z?Liu,Chem.Commun.2011,47,(8),2255-2257）。然而所采用的后修飾接枝策略效率較低并且步驟極其繁瑣。有研究利用共聚合的方式制備了硼酸功能化整體柱（L?Ren,Y?Liu,M?Dong,Z.Liu.J.Chromatogr.A.2009,1216,8421-8425；Z?Lin,J?Pang,H?Yang,Z?Cai,L?Zhang,G.Chen,Chem.Commun.2011,47,9675-9677；Y?Liu,L?Ren,Z?Liu.Chem.Commun.2011,47,5067-5069），雖硼酸鍵合效率提高且糖蛋白富集效果較好，但整體柱本身柱容量的限制使得此類材料不利于規(guī)模化蛋白樣品的預(yù)處理。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上不足，本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單、省時(shí)、易行、產(chǎn)物重現(xiàn)性高的聚合反應(yīng)方法，得到的產(chǎn)物顆粒形狀規(guī)整，單分散性好，表面不含有任何表面活性劑和添加劑。利用該聚合物材料作為富集材料，對(duì)糖蛋白的分離富集以及可以兼容后續(xù)的MALDI-TOF/MS直接分析，從而解決了樣品的分析困難。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

步驟一：在25mL的圓底燒瓶中，加入反應(yīng)溶液，加入單烯類功能單體、多烯類交聯(lián)劑和引發(fā)劑等，超聲1分鐘，使得加入的試劑溶解形成均勻的溶液，在燒瓶上裝上Dean-Stark接收器，其上接冷凝管，之后通氮?dú)?5分鐘，加入磁力攪拌子，磁力攪拌子保持300rad/min速度。反應(yīng)裝置放在油浴鍋中均勻緩慢加熱，反應(yīng)器由室溫在10～60分鐘內(nèi)升到60～140℃。維持60～140℃條件下，在1～4小時(shí)內(nèi)將反應(yīng)體系中的溶劑蒸餾掉一半，停止反應(yīng)，冷卻至室溫。之后使用高速離心機(jī)用10000rad/min的速度離心，去除上清液，加入反應(yīng)溶劑洗三遍，50℃真空干燥箱內(nèi)真空干燥24小時(shí)。

步驟二：在25mL的圓底燒瓶中，裝上冷凝管，加入反應(yīng)溶劑或者混合溶液，加入步驟一中得到的聚合物核顆粒、3-丙烯酰胺基苯硼酸、多烯類功能單體、引發(fā)劑、鏈轉(zhuǎn)移試劑等，超聲1分鐘，使得加入的試劑以及顆粒溶解形成均勻分散在溶液中，之后通氮?dú)?5分鐘，加入磁力攪拌子，磁力攪拌子保持300rad/min速度。反應(yīng)裝置放在油浴鍋中均勻緩慢加熱，在30min內(nèi)升溫至60～140℃。維持60～80℃條件下反應(yīng)4-48小時(shí)，停止反應(yīng)，冷卻至室溫。之后使用高速離心機(jī)用10000rad/min的速度離心，去除上清液，加入反應(yīng)溶劑洗三遍，50℃真空干燥箱內(nèi)真空干燥24小時(shí)。