[發明專利]一種特異性克倫特羅人工抗原的合成方法

有效

• 申請號: 201310103592.5
• 申請日: 2013-03-28
• 公開（公告）號: CN103159852A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 胥傳來;劉麗強;王利兵;匡華;徐利廣;馬偉;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種特異性克倫特羅人工抗原的合成方法，其特征在于以4-氨基-3,5-二氯苯甲酸為半抗原，將4-氨基-3,5-二氯苯甲酸上的羧基通過1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC與N-羥基琥珀酰亞胺NHS活化、或者通過三正丁胺與氯甲酸異丁酯活化，再與載體蛋白進行偶聯得到克倫特羅人工抗原，將人工抗原透析，工藝為：

（A）將4-氨基-3,5-二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解，4-氨基-3,5-二氯苯甲酸與N-羥基琥珀酰亞胺NHS，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC的摩爾比為1:1.5:2，在4℃避光攪拌反應1h，再在室溫反應12h，得活化的半抗原溶液；

取牛血清白蛋白，半抗原與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1，牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解，其中溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與N,N-二甲基甲酰胺DMF的體積比例為5:1；將活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，室溫反應24h，用PBS緩沖液透析2天，期間更換PBS緩沖液4次，得到克倫特羅人工抗原；

或（B）將4-氨基-3,5-二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解，4-氨基-3,5-二氯苯甲酸與三正丁胺，氯甲酸異丁酯的摩爾比為1:1.2:1.2，0℃反應1h，得活化的半抗原溶液；

取牛血清白蛋白，半抗原與牛血清白蛋白的摩爾比為80:1，牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸鹽緩沖液溶解，0℃預冷30min，其中溶解后的牛血清白蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的體積比例為5:1；在0℃條件下，將活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，0℃條件下反應1h，然后室溫反應24h；用PBS緩沖液透析2天，期間更換PBS緩沖液4次，得到克倫特羅人工抗原。

2.根據權利要求1所述的特異性克倫特羅人工抗原的合成方法，其特征在于，所述載體蛋白為：牛血清白蛋白BSA、陽離子化的牛血清白蛋白cBSA、匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一種。

3.根據權利要求1所述的特異性克倫特羅人工抗原的合成方法，其特征在于克倫特羅人工抗原的分子結構式如式I所示：

式I。

4.用權利要求1所述方法合成的特異性克倫特羅人工抗原的應用，其特征在于制備克倫特羅抗體，所述抗體為多克隆抗體和/或單克隆抗體。

5.用權利要求1所述方法合成的特異性克倫特羅人工抗原的應用，其特征在于在檢測克倫特羅中的應用，檢測食品中的克倫特羅殘留。