[發(fā)明專利]一種半抗原、其抗原、其相應(yīng)的抗體及其在檢測蒿甲醚中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310102015.4
• 申請日: 2013-03-27
• 公開（公告）號: CN103159778A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王保民;郭素琴;崔永亮;王敏;譚桂玉;曹振;何麗珊;張亮;張瑞;張威
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D493/20
• 分類號: C07D493/20;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/531;G01N30/60
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種半抗原、其抗原、其相應(yīng)的抗體及其在檢測蒿甲醚中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

青蒿素衍生物如青蒿琥酯、雙氫青蒿素、蒿甲醚等對治療腦型瘧疾和抗氯喹惡性瘧疾具有高效、低毒、速效、復(fù)燃率低等顯著療效。蒿甲醚（Artemether）是非洲應(yīng)用最廣的抗瘧疾藥物。

假冒、劣質(zhì)以及不符合標(biāo)準(zhǔn)的青蒿素藥物對瘧疾病情的防控造成了重大威脅，而這種偽劣假冒現(xiàn)象在東南亞、非洲等落后地區(qū)尤為突出。因此急需建立一種快捷、可靠的針對青蒿素及其衍生物的定性定量分析方法。

蒿甲醚的化學(xué)名為(3R,5αS,6R,8αS,9R,10S,12R,12αR)-十氫-10-甲氧基-3,6,9-三甲基-3,12-橋氧-12H-吡喃并[4,3-j]-1,2-苯并二塞平，CAS登記號為71963-77-4，分子式為C₁₆H₂₆O₅，相對分子量為298.37，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見式（Ⅰ）。

（Ⅰ）。

目前國內(nèi)外已發(fā)表的文獻(xiàn)中，蒿甲醚檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。這些方法都需要昂貴的儀器設(shè)備，檢測費用高，操作時間長，操作技術(shù)要求高且不能用于現(xiàn)場檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種半抗原、其抗原、其相應(yīng)的抗體及其在檢測蒿甲醚中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的半抗原為式（Ⅱ）所示的化合物；

式（Ⅱ）。

本發(fā)明還保護(hù)式（Ⅱ）所示化合物的制備方法，包括如下步驟：將式（Ⅶ）所示化合物和丁二酸酐反應(yīng)，獲得式（Ⅱ）所示化合物。

式（Ⅶ）。

制備式（Ⅱ）所示化合物時，式（Ⅶ）所示化合物與丁二酸酐的摩爾比具體可為0.9：2。制備式（Ⅱ）所示化合物時，所述反應(yīng)的條件可為：0-50℃反應(yīng)1-48小時。式（Ⅱ）所示化合物的制備方法具體如下：將0.9mmol式（Ⅶ）所示化合物和25mL有機溶劑（如二氯甲烷）室溫混合后邊攪拌邊加入2mmol丁二酸酐，冰浴冷卻后于0℃-5℃溫度條件下加入0.9mmol4-二甲氨基吡啶并冰浴反應(yīng)30min，然后自然升至室溫并反應(yīng)1h，加入等體積的水，用鹽酸調(diào)pH至3，分液后取有機相，用水洗滌后用無水MgSO4干燥,減壓脫溶后得白色粉末，即為式（Ⅱ）所示化合物。

本發(fā)明還保護(hù)式（Ⅱ）所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物。所述載體蛋白可為牛血清白蛋白或卵清白蛋白。式（Ⅱ）所示化合物與載體蛋白通過酰胺鍵連接。所述酰胺鍵是式（Ⅱ）所示化合物的羧基通過活潑酯與載體蛋白上的氨基形成的。所述偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)式見式（Ⅲ）。

所述偶聯(lián)物的制備方法包括如下步驟：在NHS和EDC的作用下促使式（Ⅱ）所示化合物與載體蛋白偶聯(lián)。制備所述偶聯(lián)物時，式（Ⅱ）所示化合物、NHS和EDC的摩爾比可為1：（1-5）：（1-5）。制備所述偶聯(lián)物時，所述反應(yīng)的條件可為：0-50℃反應(yīng)4-36小時。制備所述偶聯(lián)物時，式（Ⅱ）所示化合物與所述載體蛋白的摩爾比可為（5-30）：1；具體可為（15-17）：1，更具體可為15：1。所述偶聯(lián)物的制備方法具體如下：將0.036mmol式（Ⅱ）所示化合物、0.047mmol?NHS和0.040mmol?EDC，用有機溶劑（如DMSO）溶解，25℃攪拌反應(yīng)6小時，然后滴加入含0.0024mmol載體蛋白的載體蛋白溶液（載體蛋白溶液具體是將0.0024mmol?OVA溶于5mL?pH7.5、0.1M的PBS緩沖液得到的），4℃攪拌12小時。

所述偶聯(lián)物的制備方法包括如下步驟：在NHS和DCC的作用下促使式（Ⅱ）所示化合物與載體蛋白偶聯(lián)。制備所述偶聯(lián)物時，式（Ⅱ）所示化合物、NHS和DCC的摩爾比可為1：（1-5）：（1-5）。制備所述偶聯(lián)物時，所述反應(yīng)的條件可為：0-50℃反應(yīng)4-36小時。制備所述偶聯(lián)物時，式（Ⅱ）所示化合物與所述載體蛋白的摩爾比可為（5-30）：1；具體可為（15-17）：1，更具體可為15：1。所述偶聯(lián)物的制備方法具體如下：將0.04mmol式（Ⅱ）所示化合物、0.052mmol?NHS和0.044mmol?DCC，用有機溶劑（如DMF）溶解，25℃攪拌反應(yīng)6小時，離心（離心參數(shù)具體可為：8000rpm離心5分鐘）收集上清液，然后滴加入含0.0024mmol載體蛋白的載體蛋白溶液（載體蛋白溶液具體是將0.0024mmol?OVA溶于5mL?pH7.5、0.1M的PBS緩沖液得到的），4℃攪拌12小時。

本發(fā)明還保護(hù)所述偶聯(lián)物在制備抗體中的應(yīng)用。