[發明專利]基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法

在審

• 申請號: 201310099911.X
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103172760A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 朱蓓薇;楊靜峰;趙君;曹倩倩;朱策;姜鵬飛
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/04;A61P29/00;A61P7/02;A61P31/12
• 代理公司: 大連智慧專利事務所 21215
• 代理人: 劉琦

1.一種基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、取牡蠣或扇貝冷凍干燥至水分質量含量0～10%，攪拌粉碎成粉末，以粉末加水制備漿液；或者取鮮牡蠣或扇貝直接加水，勻漿獲得漿液；

所述漿液中固態物質量應占總質量的0.1%～5%；

S2、利用所述漿液獲得牡蠣糖原或扇貝糖原；

S3、制備硫酸化試劑；

S4、利用所述硫酸化試劑對所述扇貝或牡蠣糖原進行硫酸化修飾。

2.根據權利要求1所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S2包括如下工序：

S21、所述漿液中加入質量分數為0.1%～10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、酸性蛋白酶、糜蛋白酶、鏈酶蛋白酶中的一種；調節pH值至所用酶的適宜環境，20～50℃酶解0.5～10小時；

S22、80～100℃滅酶5-30分鐘；

S23、冷卻后調pH值至中性，

S24、離心或者過濾去沉淀，留用上清液；

S25、所述上清液加入乙醇使乙醇終濃度達到體積比50%～90%進行醇沉沉淀；0.5～24小時后傾去上清液，收集沉淀，即為相應的扇貝糖原或牡蠣糖原。

3.根據權利要求2所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，步驟S21中適宜酶解的環境分別為：所述胃蛋白酶pH1～3、木瓜蛋白酶pH5～9、胰蛋白酶pH7～9、堿性蛋白酶pH8～11或、酸性蛋白酶pH1～3、糜蛋白酶pH8～9、鏈酶蛋白酶pH7～8。

4.根據權利要求1所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S2包括如下工序：

所述漿液加熱煮沸1-10小時，冷卻后過濾或者離心，棄去沉淀；上清液加入乙醇使乙醇終濃度達到體積比50%～90%，棄去乙醇沉淀后的上清液，醇沉沉淀部分即為扇貝糖原或牡蠣糖原。

5.根據權利要求1-4任一所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，

所述步驟S3的具體工序為：按照溶劑體積與溶質質量比5～50ml:1g的比例將溶劑吡啶或者二甲基甲酰胺溶劑與溶質三氧化硫-吡啶互溶，制備所述硫酸化試劑；

或者，0～10℃下按照0.5～5:1比例將氯磺酸滴加到吡啶中，以0.5～2小時內均勻滴加完畢，制得所述硫酸化試劑。

6.根據權利要求5所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S4包括如下工序：

S41、以吡啶或二甲基甲酰胺作為溶劑將所述扇貝糖原或牡蠣糖原配制成濃度10～500mg/ml的糖原溶液；

S42、所述硫酸化試劑加入所述糖原溶液，兩種溶液的體積比例為1:5～5:1；

S43、在攪拌的情況下沸水浴反應0.5～2小時；

S44、以冰鹽浴將反應液溫度降低到0～10℃；

S45、用1-6M的NaOH或KOH調節到pH7～8；

S46、用3～10kDa孔徑的半透膜或者工業陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾4～72小時，產物溶液為硫酸化糖原溶液；

或者選用透析方法，以分子大小為3kDa～10kDa孔徑的透析袋扎緊，自來水透析4～72小時，袋內溶液為硫酸化糖原溶液。

7.根據權利要求6所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，所述硫酸化糖原溶液經過冷凍干燥或噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝或硫酸化牡蠣糖原粉。