[發明專利]一種測定草坪草內源激素的方法

無效

• 申請號: 201310098780.3
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103217495A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 常智慧;禚來強;尹淑霞;于芳芳
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/26
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種測定草坪草內源激素的方法，包括以下步驟：

1）將草坪草用磷酸鈉緩沖液和二氯甲烷進行兩次提取，兩次離心后，然后氮氣吹干，得到草坪草內源激素；

2）將步驟1）得到的草坪草內源激素用甲醇溶解后，利用固相萃取柱進行脫色脫脂，取洗脫液，然后真空抽干后，再用甲醇和乙酸的混合溶液溶解；

3）以甲醇和乙酸作為流動相，利用高效液相色譜對經過步驟2）處理后的草坪草內源激素進行測定，得到草坪草內源激素的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中，所述磷酸鈉緩沖液的濃度為0.05M，pH值為7.0，還含有0.02%～0.05%的二乙基二硫代氨基甲酸鈉。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟1）中，草坪草與磷酸鈉緩沖液的質量體積比為1:8～1:12，磷酸緩沖液與二氯甲烷的體積比為3:4～1:1。

4.根據權利要求1～3任意一項所述的方法，其特征在于，步驟1）中，用磷酸鈉緩沖液進行提取的條件包括：在4°C下提取0.8～1.2h后，用1M鹽酸調pH至2.5～3.0，優選為：在4°C下提取1h后，用1M鹽酸調pH至2.6；用二氯甲烷進行提取的條件包括：在4°C下提取0.8～1.2h，優選為：在4°C提取1h。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的方法，其特征在于，步驟1）中，兩次離心的條件包括：在8000～12000rpm下離心8～15min，取下清液，殘渣再用二氯甲烷進行提取，在8000～12000rpm下再次離心8～15min，合并下清液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）中，固相萃取柱具體為C₁₈固相萃取小柱。

7.根據權利要求1或6所述的方法，其特征在于，步驟2）中，利用固相萃取柱進行脫色脫脂，收集洗脫液的條件包括：先用甲醇活化固相萃取柱，再用濃度為80%的甲醇平衡；然后上濃度為80%甲醇溶解的草坪草內源激素，再用濃度為80%的甲醇洗脫，收集洗脫液，35°C真空抽干。

8.根據權利要求1、6或7所述的方法，其特征在于，步驟2）中，甲醇和乙酸的混合溶液中，甲醇和乙酸的體積比為2:1～1:1，乙酸的濃度為0.075%。

9.根據權利要求1～8任意一項所述的方法，其特征在于，步驟3）中，高效液相色譜的條件包括：色譜柱為C₁₈反相柱；流速為1mL/min；柱溫為30℃；進樣量為10μL；當測定的草坪草內源激素是ABA時，檢測波長為262nm；當測定的草坪草內源激素是IAA時，檢測波長為280nm。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟3）中，高效液相色譜的梯度洗脫條件為：

其中乙酸濃度為0.075%。