[發(fā)明專(zhuān)利]用于制備?？谔阋逴型肽疫苗的多肽及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310097943.6
• 申請(qǐng)日: 2013-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103214560A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖進(jìn);齊鵬;巴利民;栗利芳;宋芳;董春娜;王楠;張蕾;周強(qiáng);郭麗清;鄭應(yīng)華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)牧工商（集團(tuán)）總公司;中牧實(shí)業(yè)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/09
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/09;C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種用于制備?？谔阋逴型肽疫苗的多肽，以及含有這些多肽的疫苗及它們的制備方法。

背景技術(shù)

口蹄疫（foot?and?mouth?disease，簡(jiǎn)稱(chēng)FMD）是一種偶蹄動(dòng)物發(fā)生的急性、高度接觸性、發(fā)熱性傳染病，在世界范圍內(nèi)廣泛分布。口蹄疫的傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜后將導(dǎo)致幼畜死亡，成年動(dòng)物生產(chǎn)能力急劇下降，因此嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的發(fā)展和肉食及其畜產(chǎn)品的生產(chǎn)和供應(yīng)。目前，口蹄疫使動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的市場(chǎng)流通和國(guó)際貿(mào)易受到極大的封鎖和限制，給流行國(guó)家和地區(qū)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的。口蹄疫病毒屬于細(xì)小核糖核酸病毒，具有多型性、易變性等特點(diǎn)。目前，已知全世界有7種血清型的口蹄疫病毒：A、O、C、Sat1（南非I型）、Sat2（南非II型）、Sat3（南非III型）和Asia?I（亞洲I型）。這些主型中的每一種又分若干亞型，目前發(fā)現(xiàn)的亞型已有70多種。血清型A、O、C和Asia?I型的口蹄疫病毒最為常見(jiàn)，其中血清型A病毒的變種最多，具有超過(guò)30種亞型。研究結(jié)果表明，口蹄疫病毒的衣殼蛋白是由四種結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3和VP4（Logan?D等，1993年）組成的，每種各60個(gè)。VP1-VP3組成衣殼蛋白亞單位，位于衣殼蛋白的外側(cè)，而VP4位于病毒顆粒的內(nèi)部。VP1是主要的保護(hù)性抗原，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)O型口蹄疫有3個(gè)主要的抗原位點(diǎn)位于VP1上，其中133-160和200-213位構(gòu)成了VP1上最重要且最容易變異的保護(hù)性抗原位點(diǎn)。

口蹄疫病毒各型之間的抗原性不同，彼此之間不能交互免疫。而且，在同一種血清型中抗原差異的程度也很大，以至于能夠有效地抵抗一種亞型的口蹄疫疫苗可能針對(duì)同一血清型中的另一種亞型沒(méi)有保護(hù)性。此外，口蹄疫毒株的抗原性還在不斷發(fā)生變化，隨著時(shí)間的推移，原有疫苗的效力減弱甚至消失，因此給口蹄疫的防治工作帶來(lái)了很大的困難。

當(dāng)前在我國(guó)牛群中流行的口蹄疫主要是O型、Asia?I型和A型口蹄疫。我國(guó)對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。但是，我國(guó)現(xiàn)行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒滅活疫苗，其存在著生物安全性差、副反應(yīng)大、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等問(wèn)題。相比之下，目前世界上很多國(guó)家已經(jīng)停止使用滅活疫苗，也禁止從使用滅活疫苗的國(guó)家進(jìn)口畜產(chǎn)品。由此可見(jiàn)，在口蹄疫防治方面，我國(guó)已落后于世界發(fā)展形勢(shì)。

在口蹄疫新型疫苗的研究方面，先后有基因工程亞單位疫苗、口蹄疫病毒載體疫苗、口蹄疫基因工程修飾疫苗的研究報(bào)道，但是其在免疫效果、生物安全性方面都存在著諸多問(wèn)題，影響了這些新型疫苗的使用。此外，這些疫苗對(duì)于當(dāng)前已經(jīng)發(fā)生變異的流行毒株往往效果較差，不能有效地保護(hù)動(dòng)物。因此，本領(lǐng)域仍然存在對(duì)于安全、有效的口蹄疫新型疫苗的需求。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于制備牛口蹄疫O型合成肽疫苗的多肽，以及含有該多肽的疫苗。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種上述多肽以及疫苗的制備方法。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供上述多肽以及疫苗的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明提供一種用于制備牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽，所述多肽包含如SEQ?ID?NO.?1所示的氨基酸序列。此序列為口蹄疫O病毒的核心B細(xì)胞表位序列，負(fù)責(zé)產(chǎn)生針對(duì)口蹄疫病毒的中和抗體。

SEQ?ID?NO.?1：

YNGSCKYGDASANNVRGDLQVLALKTEKCLPTSFNYGAIK

本發(fā)明中提及的“多肽”和“合成肽”為同一概念，均是指通過(guò)固相有機(jī)合成得到的肽物質(zhì)。

優(yōu)選地，所述多肽還包含具有增強(qiáng)免疫作用的口蹄疫內(nèi)源或外源性T細(xì)胞表位氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列選自SEQ?ID?NO.?2、SEQ?ID?NO.?3和SEQ?ID?NO.?4中的一個(gè)或多個(gè)。在本發(fā)明中，由計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)口蹄疫O病毒的T細(xì)胞表位，然后利用軟件設(shè)計(jì)新的T細(xì)胞表位肽，再通過(guò)體外評(píng)價(jià)動(dòng)物細(xì)胞免疫水平，由此篩選得到上述氨基酸序列的多肽，其能夠輔助B細(xì)胞表位產(chǎn)生中和抗體。

SEQ?ID?NO.?2：

AGLAGVMVTESVAFRKKV

SEQ?ID?NO.?3：

HLEFNNFTVLRVPSFWKVSASKV

SEQ?ID?NO.?4：

SHLEFNNFTVSVPKVFWLRSAKV