[發明專利]一種鼠源單克隆抗體及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201310095347.4
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103214571A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 趙偉;魏敬雙;王惠欣;劉曉志;常亮;程立均;李燕霞;劉艷玲;段迎霞;劉祥義;劉洪喜;于蘭;李玉鳳;張靜;高健
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85;G01N33/68;G01N33/577
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技術領域

本發明涉及抗體技術領域。具體地說，本發明涉及一種新的重組抗人抗狂犬病毒單克隆抗體的單克隆抗體，及其制備方法和用途。

背景技術

狂犬病是由狂犬病毒所致的自然疫源性或動物源性人畜共患急性傳染病，流行性廣，病死率幾近百分之百，對人民生命健康造成嚴重威脅。人狂犬病主要通過患病動物咬傷、抓傷或由粘膜感染引起，在特定的條件下還可通過呼吸道氣溶膠傳染。傳染動物主要是犬(超過90%)，其次是貓。根據中國疫情報告系統資料，1998年后狂犬病疫情年增長幅度越來越高，死亡人數不斷攀升。

對于狂犬病毒暴露后預防，WHO推薦的處理方法是全程注射狂犬疫苗，同時合并注射抗狂犬病馬血清(ERIG)或抗狂犬病毒人免疫球蛋白(HRIG)。但HRIG由于來源限制價格昂貴，而馬血清制品則較易發生嚴重的過敏反應，所以現今國際上已經公認有必要用重組單克隆抗體取代狂犬病毒暴露后預防中使用的抗狂犬病毒血源抗體。國外研究者已經進行了廣泛的相關研究，并取得了顯著的成果。B.?Dietzschold利用細胞融合技術制備了多株人抗狂犬病毒單克隆抗體，發現能特異結合狂犬病毒G蛋白的一株抗體Mab57能夠高效和廣泛地中和狂犬病毒并且對狂犬病毒攻擊的實驗室嚙齒動物可以起保護作用(J?Virol.?1990?June；64?(6):?3087-3090)。B.?Dietzschold等將Mab57基因轉入SPBN重組病毒表達系統，在BSR細胞中制備了SO57抗體(J?Immunol?Methods.?200IJunl；252(1-2)：199-206，），SO57抗體重鏈和輕鏈的氨基酸序列分別見GENEBANKgi：27728677和gi：27728683。華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司把SO57的基因序列在CHO細胞表達系統中表達，構建成功高效表達該基因序列編碼抗體的工程細胞，并把得到的單抗命名為NM57，該方法操作工藝簡便、產品表達水平高（超過100毫克／升）、生產的抗體質量均一而且穩定性好，具備了產業化價值，可以取代目前所使用的抗狂犬病馬血清或人免疫球蛋白(中國專利：重組人抗狂犬病毒單克隆抗體的制備方法，公開號?CN101100663A)。

在NM57進行臨床前研究及臨床研究的過程中，以及將來成為藥物后患者應用的過程中，為了研究藥物代謝及保證用藥安全，必須檢測受試者（動物或人）或患者的血清NM57濃度和人抗NM57的抗體，但是目前還沒有實現該功能的檢測試劑或試劑盒出現，因此，迫切需要一種能有效、快速檢測NM57濃度和人抗NM57抗體的產品。

發明內容

本發明需要解決的第一個技術問題是提供一種抗NM57單克隆抗體，用于檢測NM57濃度和人抗NM57抗體。

本發明需要解決的第二個技術問題是提供一種編碼上述抗NM57單克隆抗體的DNA分子。

本發明需要解決的第三個技術問題是提供一種表達載體。

本發明需要解決的第四個技術問題是提供一種真核宿主細胞。

本發明需要解決的第五個技術問題是提供一種該重組抗NM57單克隆抗體的制備方法。

本發明需要解決的第五個技術問題是提供上述單克隆抗體的兩種用途。

為實現上述發明目的，本發明一方面提供了一種重組抗NM57單克隆抗體，該抗體含有重鏈可變區和輕鏈可變區，其特征在于，輕鏈可變區具有SEQID?NO:l所示的氨基酸序列，重鏈可變區具有SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列。

本發明另一方面提供了編碼上述單克隆抗體的DNA分子。

在一個較佳的實例中，該DNA分子含有SEQ?ID?NO:3所示的編碼所述單抗輕鏈可變區的核苷酸序列，以及SEQ?ID?NO:4所示的編碼所述單抗重鏈可變區的核苷酸序列。

本發明第三方面提供了一種表達載體，該表達載體含有上述DNA分子。

本發明第四方面提供了一種宿主細胞，其特征在于，它被上述表達載體轉化。在一個較佳的實例中，該宿主細胞是CHO細胞。

本發明第五方面提供了一種制備上述單克隆抗體的方法，其特征在于，該方法包括：

a）構建含有權利要求2所述DNA分子的表達載體；

b）用步驟a）所述的表達載體轉化宿主細胞；

c）培養步驟b）所得的宿主細胞；

d）分離純化獲得所述單克隆抗體。