[發明專利]一種降解石油的耐油耐鹽菌株及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 201310095318.8
• 申請日: 2013-03-25
• 公開（公告）號: CN103205378A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 王昌祿;張麗紅;王玉榮;李貞景;陳勉華
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;B09C1/10;C12R1/19
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種降解石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：名稱為SY-1，分類名稱：大腸埃希氏菌Escherichia?coli，保藏編號為：CGMCC?No.7075，保藏日期：2012年12月31日，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

2.根據權利要求1所述的降解石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：所述菌株對石油的降解率為40%-50%。

3.根據權利要求1所述的降解石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：所述菌株使用的培養基配方：KH₂PO₄?3.4?g，Na₂HPO_4?1.5?g，（NH₄）₂SO₄?4.0?g，MgSO₄?0.7?g，NaCl?1.6?g，酵母粉0.01g，Tween-80?0.6?mL，石油5.0~25.0?g，自來水1000?mL，pH?7.2～7.6，不同階段添加不同含量石油。

4.根據權利要求1所述的石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：所述菌株以石油為唯一碳源。

5.根據權利要求1所述的降解石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：所述菌株的耐鹽性為?NaCl質量濃度為7%。

6.根據權利要求1所述的降解石油的耐油耐鹽菌株，其特征在于：所述菌株對石油的耐性為石油質量濃度為10%。

7.一種如權利要求1至6任一項所述的降解石油的耐油耐鹽菌株的篩選方法，其特征在于：篩選步驟如下：

⑴取樣：選取某油田儲油罐和采油井處2-10?cm的土壤，除去雜物將其裝入無菌自封袋內備用；

⑵菌株初篩：稱取土壤樣品制成土壤懸液，按體積比為1：8~12將土壤懸液加入到石油質量濃度為0.5%的無機礦物鹽培養液中，培養3?d后進行4個周期的菌種馴化，馴化步驟是：按體積比為1：8~12取上一次的培養液加入到含有石油的無菌無機礦物鹽培養液中（石油濃度從0.5-2.5?g/100mL，每次增加0.5?g石油），取最后一次馴化菌液，梯度稀釋成10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6，10^-7，分別取10^-5，10^-6，10^-7稀釋菌液0.5mL分別加入到牛肉膏蛋白胨、PDA培養基、高氏1號固體培養基平板上，涂布均勻，于30℃培養2-3?d，挑取不同菌落形態的菌株，保存備用；

⑶菌株復篩；挑取步驟⑵中分離保存的菌株，分別接種到含有0.5?g石油/100mL無機礦物鹽培養基固體平板上，分別于30℃培養2-3?d，挑取在菌落周圍形成噬油斑的菌株，劃線分離為單菌株，保藏備用；

⑷菌株耐油特性：將步驟⑶中待測定的菌株活化后種子液，按3%的接種量接入每100?mL含石油分別為0.5?g、1?g、2?g、4?g、?6?g、8?g、10?g、12?g的無機鹽礦物培養液中，30℃、160~200?r/min培養6~8?d，取培養液顏色改變并變渾濁的菌株進入下一步；

⑸菌株耐鹽特性：將步驟⑷中待測定菌株活化后分別以3%的接種量接入每100?mL含質量分數為1%、3%、5%、7%和9%的NaCl的牛肉膏蛋白胨培養基中，30℃，160~200?r/min，培養10~14?h，?在質量濃度為7%的NaCl中能夠生長的菌株即為降解石油的耐油耐鹽菌株。

8.如權利要求1至6任一項所述的降解石油的耐油耐鹽菌株在對石油污染地進行生態修復中的應用。

9.如權利要求1至6任一項所述的降解石油的耐油耐鹽菌株在制備石油污染地生態修復的菌種發酵劑中的應用。

10.一種利用如權利要求1至6任一項所述的降解石油的耐油耐鹽菌株制備得到的菌種發酵劑。