[發(fā)明專利]一株綠膿桿菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310095235.9
• 申請(qǐng)日: 2013-03-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103146621A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武玉強(qiáng);李自英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N11/10;C02F3/34;C12R1/385
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株綠膿桿菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近幾十年來(lái)，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，集約化、高密度養(yǎng)殖規(guī)模日益擴(kuò)大，但由于種投餌造成養(yǎng)殖水體中積累大量的殘餌，以及養(yǎng)殖動(dòng)物的糞便及動(dòng)植物尸體等原因?qū)е滤w氮元素含量嚴(yán)重超標(biāo)，富營(yíng)養(yǎng)化加劇，使得養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境遭到破壞，魚(yú)蝦病害頻發(fā)，最終造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

研究表明，氨氮是水相環(huán)境中氮的主要形態(tài)，也是造成水體富營(yíng)養(yǎng)化的主要污染物，其中以銨態(tài)氮最多，銨態(tài)氮中的非離子形態(tài)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性，且隨著pH和溫度而變化，氨氮過(guò)高極易容易造成水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物死亡。

目前，水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，人們控制氨氮污染的辦法通常是通過(guò)換注新水降低氨氮濃度，采用曝氣方式使部分氨氮逸出水面，例如采用氯消毒去除氨氮，或使用氧合器等來(lái)調(diào)節(jié)水質(zhì)。由于上述方法不能使氨氮完全能降低到水質(zhì)要求標(biāo)準(zhǔn)，例如受水源限制，或是魚(yú)類發(fā)生氣泡病、細(xì)菌性鰓病等，因此對(duì)氨氮污染的控制效果并不理想。而近年來(lái)，微生物脫氮技術(shù)去除的微生物技術(shù)開(kāi)始迅速發(fā)展，微生物降解氨氮的效率穩(wěn)定，二次污染小的優(yōu)點(diǎn)受到水產(chǎn)養(yǎng)殖及環(huán)保產(chǎn)業(yè)的高度關(guān)注，這就要求能夠篩選到具有高效氨氮降解功能的微生物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株綠膿桿菌及其應(yīng)用，所述綠膿桿菌篩選自南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖塘的底泥，能高效降解水體中的氨態(tài)氮，可廣泛應(yīng)用于對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖及生活廢水的處理。

本發(fā)明一方面提供了一株綠膿桿菌AN5（Pseudomonas?aeruginosa?AN5），已于2013年3月6日保藏于位于中國(guó)武漢武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO:M2013068。

本發(fā)明的微生物可應(yīng)用于水體凈化領(lǐng)域。

本發(fā)明的另一方面提供了含有上述綠膿桿菌的微生物制劑及其應(yīng)用。

上述綠膿桿菌可以菌粉的形式制成微生物添加劑，制備過(guò)程為：將綠膿桿菌AN5活化、擴(kuò)大培養(yǎng)，經(jīng)液態(tài)發(fā)酵，離心收集菌泥，加入淀粉載體，烘干制成菌量為100～1000億/g的菌粉。

上述綠膿桿菌AN5菌粉用于養(yǎng)殖廢水或生活污水的凈化處理。

本發(fā)明從南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖塘底泥中篩選到一株綠膿桿菌AN5。該菌株能高效降解水體中的銨態(tài)氮，且該菌株?duì)I養(yǎng)需要簡(jiǎn)單，繁殖力強(qiáng)，可開(kāi)發(fā)為水產(chǎn)微生物制劑及廢水處理劑，應(yīng)用前景廣闊。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：綠膿桿菌AN5分離篩選及鑒定

1、篩選的污泥取自江蘇射陽(yáng)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖塘。

2、培養(yǎng)基：

1）富集培養(yǎng)基：葡萄糖5g、硫酸銨2g、氯化鈉2g、硫酸亞鐵0.4g、磷酸氫二鉀1g、pH7.2，硫酸鎂0.5g、水1000mL；

2）分離培養(yǎng)基：富集培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加20g的瓊脂粉；

3）篩選培養(yǎng)基：葡萄糖5g、硫酸銨0.225g、氯化鈉1g、磷酸氫二鉀0.5g、pH7.2、硫酸鎂0.25g、去離子水定容至1000mL，其中氨氮含量為45mg/L，分裝于250mL小三角瓶，每瓶100mL，121℃滅菌30min。

4）葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基：蛋白胨5g、葡萄糖5g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈉5g，水1000mL，pH7.0，過(guò)濾分裝，121℃滅菌30min。

3、篩選：

取南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖塘污泥，加一半水?dāng)噭颍?jīng)1000r/min離心5min后，取上清接種于富集培養(yǎng)基,于30℃培養(yǎng),富集7d，且每隔1d向其中加入硫酸銨溶液1ml,以淘汰不能利用NH₄⁺的微生物。發(fā)酵液經(jīng)梯度稀釋后涂布在倒置的分離培養(yǎng)基平板上,于30℃培養(yǎng)，挑取平板上長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行重復(fù)分離純化，直到得到單菌株的純培養(yǎng)，本次實(shí)驗(yàn)共獲得10株單菌落，并分別依次命名為AN1、AN2、AN3至AN10。將純化得到的菌株接種到篩選培養(yǎng)基中，測(cè)試各菌株在30℃、150r/min培養(yǎng)24h時(shí)上述10株菌對(duì)氨氮的降解情況，其中菌株AN5對(duì)氨氮的降解率最高，達(dá)71.93%（表1）。

表1：10株菌在24h降解氨氮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果