[發明專利]β2受體生物傳感器、其制備方法及其應用無效

申請號：	201310094697.9	申請日：	2013-03-22
公開（公告）號：	CN103196970A	公開（公告）日：	2013-07-10
發明（設計）人：	蘇潔;沈敏;戴小峰;郭敏;顧鳴;陳宇光	申請（專利權）人：	上海大學
主分類號：	G01N27/327	分類號：	G01N27/327;G01N27/48;C07K14/72;C07K1/22
代理公司：	上海上大專利事務所(普通合伙) 31205	代理人：	陸聰明
地址：	200444***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	受體生物傳感器制備方法及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種電化學生物傳感器、制備方法及其應用，特別是一種β2受體生物傳感器、制備方法及其應用。

發明背景

β2腎上腺素能激動劑（簡稱β2激動劑或β2配體、俗稱瘦肉精）是一類人工合成激素類藥物，家族成員達數十種之多。其共同作用機制是：β2激動劑首先結合于細胞膜上的β2腎上腺素能受體（簡稱β2受體），通過G蛋白偶聯的cAMP信號轉導途徑發揮正常生理效應，同時還具有增強肌肉，減少脂肪的生理作用，已被濫用作生長促進劑以提高家畜瘦肉率，肉類食品中的該類藥物殘留嚴重危害人民身體健康。

現有檢測技術無法根本遏制β2激動劑的濫用。

生物電化學傳感器主要由生物分子識別和信息轉換部件兩部分組合構成。其設計原理是待測物通過生物分子識別部件將被感知物質的非電信號轉換成可測量的電信息，再經過放大信號處理，進行信號輸出。電化學體系借助電極實現電能的輸入或輸出，從而獲得電極表面修飾物質的電信號，常用的為三電極體系。三電極體系包括工作電極、輔助電極（也稱對電極）和參比電極，電流流經工作電極和對電極。電化學方法作為一種分析檢測方法，具有靈敏度高、快速、簡便快捷等優點。

以電化學為基礎發展起來的受體生物傳感器技術如今受到了極大的關注。電化學受體生物傳感器是將受體蛋白（或載有該受體蛋白的細胞膜）作為分子識別元件固定于金屬表面從而構建工作電極，當與待測定的配體分析物發生親合性結合時，可在三電極體系中將這種結合作用轉換、放大并輸出電化學信號。電化學受體生物傳感器技術綜合了現代生物和微電子二大技術，既具有前者受體-配體結合的高度特異性和廣譜性的特點，又具有后者靈敏、快速、操作簡易的特點，這種明顯的優勢有望發展成為強有力的新型檢測技術

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種檢測β2激動劑的電化學β2受體生物傳感器，該傳感器通過配體-受體的特異結合，實現對于β2激動劑的檢測。

本發明的目的之二在于提供該傳感器的制備方法。

本發明的目的之三在于提供該傳感器在檢測β2激動劑中的應用。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種β2受體生物傳感器，為三電極體系傳感器，對電極是鉑電極，參比電極是飽和甘汞電極，工作電極為金電極，其特征在于在所述的金電極上修飾有重組β2腎上腺素能受體，該重組β2腎上腺素能受體該重組β2腎上腺素能受體為SEQ?ID?NO：1所示的堿基序列。其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：2所示

一種制備上述的β2受體生物傳感器的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.?將預處理好的金電極浸入1?mM?巰基丙酸MPA溶液中修飾過夜；

b.?將步驟a所得的金電極浸入含400?mM?1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙酸）碳二亞胺鹽酸鹽EDC、200?mM?N-羥基琥珀酰亞胺NHS的水溶液中10?min，超純水徹底清洗后浸入含100?mM?組氨酸的水溶液中10?min，超純水清洗；

c.?將步驟b所得金電極浸入1?μg/mL的氧化鎳（NiO）納米顆粒水溶液中10?min，超純水清洗；

d.?將步驟c所得金電極浸入0.27mg/mL的增溶β2受體蛋白水溶液中10～30?min，經超純水清洗得到經β2受體修飾的金電極；

e.將步驟d所得金電極作為工作電極與鉑電極和飽和甘汞電極一起組成三電極體系的β2受體生物傳感器。