[發明專利]土鱉蟲蛋白酶酶解物及其應用

在審

• 申請號: 201310094652.1
• 申請日: 2013-03-23
• 公開（公告）號: CN104055800A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 李曉燕;趙韶華;王鑫國;王玉蓉
• 申請（專利權）人: 河北以嶺醫藥研究院有限公司
• 主分類號: A61K35/64
• 分類號: A61K35/64;A61K38/01;A61P7/02
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技術領域

本發明涉及一種中藥制藥領域，具體涉及土鱉蟲酶解物及其應用。

背景技術

土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉Eupolyphaga sinensis Walker 或冀地鱉Steleophaga plancyi（Boleny）的雌蟲干燥體；主產于江蘇、湖北、河南、河北等地；味咸，寒；有小毒；歸肝經。主要功能為破血逐瘀，續筋接骨。用于跌打損傷，筋骨骨折，血瘀經閉，產后瘀阻腹痛，癥瘕痞塊。

土鱉蟲目前報道的主要成分為揮發油和氨基酸。但具體活性成分未有文獻報道，傳統中藥以土鱉蟲全蟲入藥，存在著服用劑量大，易造成微生物污染等弊病。鑒于動物類蛋白質、粘多糖等大分子物質只有到達胃腸道后受消化酶、酸、堿等作用，方可被酶解或者水解成小分子的肽、低聚糖和其他小分子物質，吸收入血而發生藥效，故生物酶仿生提取方法模擬體內消化過程，提取的有效成分治療效果更佳。

發明內容

本發明公開了一種土鱉蟲蛋白酶酶解物及其應用，具有很好的抗凝血和溶栓作用。

本發明所采用的技術方案：

土鱉蟲蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選土鱉蟲，粉碎成細粉；

B、將土鱉蟲細粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，離心；

C、取上清液，干燥，得到土鱉蟲胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣轉入人工腸液，加入胰蛋白酶水解，得到土鱉蟲胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為土鱉蟲蛋白酶酶解物。

土鱉蟲蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選土鱉蟲，粉碎成細粉；

B、將土鱉蟲細粉置于人工胃液中，密閉，于37℃恒溫水浴30min，加入胃蛋白酶水解2-3小時，得到胃蛋白酶酶解液，將胃蛋白酶解液置于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，離心；

C、取上清液，干燥，得土鱉蟲胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣加入人工腸液，密閉，于45℃恒溫水浴30min后，加入胰蛋白酶水解2-4小時，將酶解液于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，離心15min，取上清液，干燥，得土鱉蟲胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為土鱉蟲蛋白酶酶解物。

土鱉蟲蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選土鱉蟲，粉碎成細粉；

B、向土鱉蟲細粉中加入與土鱉蟲細粉重量體積比為1：20的人工胃液，密閉，于37℃恒溫水浴30min，加入2%胃蛋白酶水解2-3小時，得到胃蛋白酶酶解液，將胃蛋白酶酶解液，置于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，以4200r/min離心15min；

C、取上清液，干燥，得土鱉蟲胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣加入20倍量人工腸液，密閉，于45℃恒溫水浴30min后，加入4%胰蛋白酶水解2-4h，將酶解液于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，以4200r/min離心15min，取上清液，干燥，得土鱉蟲胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為土鱉蟲蛋白酶酶解物。

土鱉蟲蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選土鱉蟲，粉碎成細粉；

B、向土鱉蟲細粉中加入與土鱉蟲細粉重量體積比為1：20的人工胃液，密閉，于37℃恒溫水浴30min，加入3%胃蛋白酶水解2-3小時，得到胃蛋白酶酶解液，用1mol/mlNaOH溶液調節酶解液的pH=6.8，將胃蛋白酶酶解液置于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，以4200r/min離心15min；

C、取上清液，干燥，得土鱉蟲胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣加入20倍量人工腸液，密閉，于45℃恒溫水浴30min后，加入3%胰蛋白酶水解2-4h，將酶解液于85℃恒溫水浴15min，冷卻至室溫，以4200r/min離心15min，取上清液，干燥，得土鱉蟲胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為土鱉蟲蛋白酶酶解物。

土鱉蟲蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選土鱉蟲，粉碎成細粉；