[發明專利]一種煙草赤星病菌孢子懸浮液及其應用

有效

• 申請號: 201310094167.4
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103194421A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 方敦煌;劉勇;李永平;肖炳光
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12Q1/18;C12Q1/02;C12R1/645
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠;姜開遠

1.一種煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征在于所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液是按以下步驟制備的：

A、病菌分離：從發病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；

B、病菌培養：將菌種產生孢子的菌絲點接到培養基平板上，每個平板接種3~4點，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27~29℃恒溫培養4~6d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養物用于誘導產孢；

C、誘導產孢：將符合誘導產孢條件的培養基平板密封后置于2~4℃的冰箱內黑暗誘導培養2~3d，然后轉入培養箱，黑暗、梯度降溫培養，歷時2~3d由20℃降溫至15℃；

D、制備孢子懸浮液：誘導培養完成后，使用促進孢子萌發溶液將培養基平板上的孢子和菌絲洗下，組織搗碎1~2min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。

2.根據權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：B步驟所述的培養基為燕麥培養基、馬鈴薯葡萄糖培養基、馬鈴薯蔗糖培養基、查彼培養基或理查培養基。

3.根據權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：D步驟所述的促進孢子萌發的溶液為1~2%的滅菌葡萄糖、果糖、蔗糖、蛋白胨溶液中一種或一種以上組合。

4.根據權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：D步驟所述的促進孢子萌發溶液為2~5%感病品種煙草成熟的新鮮煙葉組織搗碎液，所述的組織搗碎液是經過濾滅菌的。

5.根據權利要求4所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：所述的感病品種煙草為K326、云煙85或G140。

6.根據權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：D步驟所述的組織搗碎采用的是研缽、搗碎機或研磨機。

7.根據權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是：D步驟所述的過濾為脫脂棉過濾或4~6層脫脂紗布過濾。

8.一種權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在煙草品種抗感赤星病測定中的應用。

9.一種權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在防治煙草赤星病藥劑、生防菌或天然產物篩選中的應用。

10.一種權利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在研究煙草赤星病菌的土壤生態及病菌侵染循環中的應用。