[發明專利]包括1300A>T突變的CYP2C9基因片段、所編碼的蛋白質片段及其應用

有效

• 申請號: 201310093803.1
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103173443A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 蔡劍平;李傳保;胡國新;戴大鵬;王雙虎;耿培武
• 申請（專利權）人: 衛生部北京醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N9/02;C12Q1/68
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 王昭林;陳悅軍

技術領域

本發明屬于生物學領域，涉及單堿基突變。更具體地，本發明涉及CYP2C9基因相對于SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1300位的突變位點，包含該突變位點的核酸片段及其相應編碼的蛋白質片段。本發明還涉及鑒定所述突變位點的試劑和檢測方法，以及鑒定該位點在指導用藥中的應用。

背景技術

CYP2C9是細胞色素P450酶大家族CYP2C亞家族中最重要的一員，約占人肝微粒體CYP酶總量的20%。有大約10～16%臨床常用藥物經由CYP2C9氧化代謝，其中主要包括甲苯磺丁脲、S-華法林、苯妥英、格列吡嗪、格列苯脲、托拉噻咪、氯沙坦、厄貝沙坦和許多非甾體類抗炎藥物(如:布洛芬、氯諾昔康、雙氯芬酸和萘普生)等藥物（參見參考文獻1-5）。

CYP2C9基因具有高度多態性。目前為止，國際上已命名的等位基因共有57種（http://www.cypalleles.ki.se），除去野生型（CYP2C9*1）外，共有56種突變類型可引起CYP2C9蛋白氨基酸組成發生改變，另外還有多種新發現的突變尚未被命名。研究較多且臨床意義較大的突變類型主要包括以下10種：CYP2C9*2、*3、*5、*6、*8、*11、*12、*13、*14、*16，其中人種分布最廣、研究最多、中國人群研究資料相對最豐富的突變型是CYP2C9*2（430C>T）、CYP2C9*3（1075A>C）、及CYP2C9*13（269T>C）（參見參考文獻6-17、20）。

根據目前的臨床研究顯示，CYP2C9基因的這種多態性是造成CYP2C9酶活性在個體之間極大不同的主要原因，因此在攜帶不同CYP2C9基因型的個體間可引起藥物療效的極大差異，甚至產生嚴重的藥物毒副作用或治療不充分。因此，研究CYP2C9基因多態性對藥物療效的影響將對臨床合理用藥提供重要的科學依據（參見參考文獻18、19、21、22）。

發明內容

本發明的目的是提供CYP2C9基因的新的單堿基突變位點，包含該突變位點的核酸片段、其編碼的蛋白質片段及鑒定該突變位點在用藥指導中的應用。

本發明的第一個方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含對應于SEQ?IDNO.1的第1001位的突變位點，且是SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列中的至少10個連續核苷酸，其中第1001位的核苷酸是T；或者所述核酸片段包含對應于SEQ?ID?NO.2的第1300位的突變位點，且是SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個連續核苷酸，其中第1300位的核苷酸是T；或者為上述核酸片段的互補序列。

本發明的第二個方面是提供與含有對應于SEQ?ID?NO.1的第1001位或對應于SEQ?ID?NO.2的第1300位的突變位點的等位基因片段或其互補序列全部或部分雜交的等位基因特異性寡核苷酸，其中SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1300位的突變位點的核苷酸是T；所述等位基因片段是SEQID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個連續核苷酸或其互補序列。

本發明的第三個方面是提供用于檢測和/或分析單堿基突變的試劑盒，所述試劑盒包含本發明的核酸片段或等位基因特異性寡核苷酸，或包含SEQ?IDNO.14和/或SEQ?ID?NO.15和/或SEQ?ID?NO.23所示的序列片段。

本發明的第四個方面是提供本發明的核酸片段或寡核苷酸在檢測CYP2C9基因突變中的應用，其中所述核酸片段或寡核苷酸用作探針或引物。

本發明的第五個方面是提供一種用藥指導，包括檢測待測樣品中CYP2C9基因的對應于SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1300位的單堿基突變；根據檢測到的突變，調整由CYP2C9代謝的藥物的給藥量。

本發明的第六個方面是提供分析核酸的方法，所述方法包括分析待測樣品中的包含對應于SEQ?ID?NO.1的序列的核酸中對應于第1001位的核苷酸或分析待測樣品中的包含對應于SEQ?ID?NO.2的序列的核酸中對應于第1300位的核苷酸。

本發明的第七個方面是提供CYP2C9蛋白或其片段或變異體，所述蛋白序列為SEQ?ID?NO.3所示的序列；所述片段或變異體包含對應于SEQ?ID?NO.3的第434位的苯丙氨酸，并且為SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列的至少10個連續氨基酸。