[發(fā)明專利]一種糞鏈球菌和酵母菌共生培養(yǎng)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310093122.5
• 申請日: 2013-05-03
• 公開（公告）號: CN103184179A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 付保榮;孫冶;李鐵民;杜麟;楊玉東;劉宏生;郭鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/18;C12R1/46;C12R1/865
• 代理公司: 沈陽杰克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物共生培養(yǎng)的方法，具體地涉及一種兼性厭氧糞鏈球菌和酵母菌共生培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)

糞鏈球菌作為一株優(yōu)良的益生素菌株，它經(jīng)過系列工藝制成的微生物制劑，直接飼喂畜禽后，有利于改善畜禽胃腸道內(nèi)的微生物結(jié)構(gòu)，競爭性排斥胃腸道內(nèi)病原性微生物，維持其微生態(tài)平衡，增強(qiáng)消化功能，促進(jìn)畜禽的營養(yǎng)吸收與健康發(fā)育，提高機(jī)體免疫能力，保證畜禽充分發(fā)揮生長的遺傳優(yōu)勢，間接提高生產(chǎn)能力。這在國外許多地區(qū)的畜禽飼料中已經(jīng)普遍使用。

酵母（Yeast）屬于真菌，不是人和動(dòng)物腸道的固有菌，但可以產(chǎn)生多種消化酶類，可以在消化道內(nèi)代謝。作為益生素使用的酵母則是以活細(xì)胞的形式，通常為酵母培養(yǎng)物（Yeast?Culture，YC）。酵母培養(yǎng)物中含豐富的蛋白質(zhì)，氨基酸以及多種維生素，尤其是B族維生素以及各種消化酶類，在飼料工業(yè)中酵母菌主要作為蛋白飼料使用。酵母發(fā)酵飼料能促進(jìn)微生物繁殖，提高消化率，促進(jìn)增重，提高飼料報(bào)酬。酵母越來越被廣泛用于優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料的生產(chǎn)。

由于糞鏈球菌兼性厭氧而較難培養(yǎng)，再加上糞鏈球菌產(chǎn)酸能力比較強(qiáng)，在其生長過程中能夠產(chǎn)生乳酸，隨著乳酸含量逐漸積累增多，導(dǎo)致pH值下降。酸度過大影響菌種自身的生長，發(fā)酵液的菌數(shù)較少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是以獲得高數(shù)量活菌為目的，提供一種成本低、作用效果穩(wěn)定的，將糞鏈球菌與酵母菌株共生培養(yǎng)的方法，發(fā)揮兩菌株間的協(xié)同作用，促進(jìn)兩株菌共同生長，達(dá)到比單一菌的益生菌制劑能發(fā)揮更好的作用。

本發(fā)明中酵母菌是好氧型真菌，糞鏈球菌是兼性厭氧型細(xì)菌，為了達(dá)到共生培養(yǎng)及獲得高數(shù)量的混合菌，發(fā)明人從兩種菌株各自生長繁殖的特點(diǎn)出發(fā)，設(shè)計(jì)接種量、初始pH、菌株添加順序、振蕩轉(zhuǎn)速以及培養(yǎng)時(shí)間，以促進(jìn)它們共生培養(yǎng)。具體方法為：酵母菌和糞鏈球菌種子液的接種量分別為2.5%和1.0%，初始pH?為7.0，先將糞鏈球菌種子液接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h后，再添加酵母菌種子液，于30℃，振蕩轉(zhuǎn)速為180-240rpm?，培養(yǎng)20h。

酵母菌和糞鏈球菌復(fù)合培養(yǎng)效果的好壞與培養(yǎng)基的組成成分有著緊密的聯(lián)系，針對兩株菌生長特點(diǎn)，通過正交設(shè)計(jì)方法，對復(fù)合菌培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)選的最佳培養(yǎng)基的配方為：每1000ml培養(yǎng)基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖12-24g、酵母粉5-10g。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明通過設(shè)計(jì)的培養(yǎng)方法和優(yōu)選的培養(yǎng)基，通過糞鏈球菌和酵母菌的協(xié)同效應(yīng)，降低了發(fā)酵成本和時(shí)間，維持了穩(wěn)定的培養(yǎng)液pH值范圍，提高了活菌數(shù)量，更好地發(fā)揮了復(fù)合菌劑的作用效果。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的方法混合菌不同接種量與培養(yǎng)菌量圖。

圖2是本發(fā)明的方法混合菌在不同初始pH的液體培養(yǎng)的菌量圖。

圖3是本發(fā)明的方法混合菌共生與單獨(dú)培養(yǎng)過程中菌液pH的變化圖。

圖4是本發(fā)明的方法不同振蕩轉(zhuǎn)速下混合菌生長量圖。

圖5是本發(fā)明的方法不同培養(yǎng)時(shí)間的混合菌菌量圖。

圖6是本發(fā)明的方法混合菌在5L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)菌量與pH的變化圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1??混合菌不同接種量與培養(yǎng)菌量的關(guān)系

（一）培養(yǎng)基的配方為：每1000ml培養(yǎng)基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖18g、酵母粉8g。

（二）方法：分別按釀酒酵母菌種子液的接種量為2%、2.5%、3%、3.5%；分別按糞鏈球菌種子液的接種量為0.5%、1.0%、1.5%、2.0%；初始pH?為7.0，先將糞鏈球菌種子液接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h后，再添加釀酒酵母菌種子液，于30℃，振蕩轉(zhuǎn)速為180rpm，培養(yǎng)20h。結(jié)果見圖1。

釀酒酵母菌和糞鏈球菌分別屬于真菌和細(xì)菌，單個(gè)酵母細(xì)胞的大小要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于單個(gè)糞鏈球菌細(xì)胞，所以酵母菌對于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗以及產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的數(shù)量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于糞鏈球菌。由于不同種間菌株在同一空間內(nèi)共生培養(yǎng)，互相爭奪營養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生抑制對方生長的代謝產(chǎn)物。通過調(diào)節(jié)接種量與添加方式可以減少它們之間的相互作用，來獲得高數(shù)量的復(fù)合菌株。從圖1可見，當(dāng)釀酒酵母菌和糞鏈球菌種子液接種量分別為2.5%和1.0%時(shí)，糞鏈球菌的活菌數(shù)量最高，因此本發(fā)明接種量優(yōu)選為，釀酒酵母菌2.5%和糞鏈球菌1.0%。

實(shí)施例2???混合菌在不同初始pH的液體培養(yǎng)的菌量

（一）培養(yǎng)基的配方為：每1000ml培養(yǎng)基中，含有蛋白胨24g、葡萄糖18g、酵母粉8g。