[發(fā)明專利]一種去甲氯胺酮人工抗原的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310092229.8
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103288952A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 沈海英;徐建明
• 申請（專利權）人: 杭州宏泰生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/107
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 俞潤體;沈相權

1.一種去甲氯胺酮人工抗原的制備方法，其特征在于按以下步驟進行：

(1)、?制備人工半抗原---?NKET半抗原的合成:

?(a)?、將四氫呋喃和吡啶按照體積比為4：1相混合至完全溶解得到溶液A，放置在溫度為4℃?的冰箱內(nèi)備用；

?????(b)、?取50?mg?的NKET溶液、15mg的氰基硼氫化鈉溶液和?200ul?15％?的琥珀醛酸溶液，分別滴加溶液A?30ml、溶液A?5ml和溶液A?5ml，放置在溫度為4℃?的冰箱內(nèi)備用；?

?????(c)、?將準備好的琥珀醛酸溶液逐滴加入到NKET溶液中，在溫度為4?℃下進行磁力攪拌，反應時間為10min；再逐滴加入準備好的氰基硼氫化鈉溶液，形成反應混合物，將反應混合物在溫度為4℃下進行磁力攪拌，磁力攪拌的時間為4h，直至反應完全后，將反應混合物低溫旋轉蒸發(fā)至干，所得產(chǎn)物即為NKET半抗原；

(2)?、制備去甲氯胺酮人工抗原---去甲氯胺酮-BSA的合成:

(d)?、取上述NKET半抗原20mg，溶于2?mL的?N，N-二甲基甲酰胺溶液中，得到B液，常溫放置備用；

????(e)?、將牛血清蛋白溶于PBS緩沖液中，得到濃度為5mg/ml的C液；

??(f)?、在常溫磁力攪拌條件下,?將100mg?的1一3一乙基碳二亞胺溶液滴加到B液，攪拌反應20min后，形成反應液，將該反應液滴加至10ml的C液中，再加入108mg的N-羥基硫代琥珀酰亞胺，在室溫下進行攪拌過夜，形成人工抗原混合液；

（g）、制備鈉離子濃度為0.1mol/L的PBS緩沖液，pH為7.2～7.4；

????(h)?、將人工抗原混合液在PBS緩沖液中進行透析，在溫度為4℃下進行攪拌透析,每4小時換一次PBS緩沖液,透析時間為2天,形成透析液，紫外掃描透析液至無小分子吸收峰時,將產(chǎn)物離心后取上清,在無菌條件下通過0.2μm?的濾膜，即得到人工抗原：去甲氯胺酮-牛血清蛋白。