[發(fā)明專利]水稻的白葉枯病抗性的鑒定方法及miRNA397a基因位點(diǎn)的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310091652.6
• 申請日: 2013-03-21
• 公開（公告）號: CN103184286A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭海;章偉雄;張靜;周俊飛
• 申請（專利權(quán)）人: 江漢大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京三高永信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11138
• 代理人: 徐立

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種水稻的白葉枯病抗性的鑒定方法及miRNA397a基因位點(diǎn)的應(yīng)用。

背景技術(shù)

水稻是我國最主要的糧食作物，白葉枯病是水稻兩大主要病害之一，屬世界性病害，以亞洲稻區(qū)發(fā)生為重。白葉枯病發(fā)病率高、傳染快，發(fā)病稻田減產(chǎn)20-30%，甚至能夠達(dá)到50%。

培育并利用抗病品種是解決白葉枯病造成的糧食減產(chǎn)最經(jīng)濟(jì)、最有效的手段，因此，需要對所栽培的水稻白葉枯病抗性進(jìn)行鑒定。目前，鑒定水稻白葉枯病的方法通常采用DNA(Deoxyribonucleic?acid，脫氧核糖核酸)分子標(biāo)記，利用DNA連鎖標(biāo)記的原理，鑒定水稻是否帶有白葉枯病抗性基因，與傳統(tǒng)應(yīng)用的常規(guī)遺傳標(biāo)記相比，分子標(biāo)記具有不受季節(jié)、環(huán)境限制、不存在表達(dá)與否及基因組DNA變異及其豐富等優(yōu)點(diǎn)。

在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題：

即便患病的植株中存在抗性基因也不代表該抗性基因具有活性，如果該抗性基因沉默了，那么在生產(chǎn)時(shí)依舊會(huì)表現(xiàn)為感病，干擾實(shí)驗(yàn)人員的判斷，若直接投入到生產(chǎn)中，會(huì)給糧食生產(chǎn)帶來損失。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決利用DNA分子標(biāo)記鑒定水稻是否抗白葉枯病不夠準(zhǔn)確的缺點(diǎn)，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種水稻的白葉枯病抗性的鑒定方法及miRNA397a基因位點(diǎn)的應(yīng)用。所述技術(shù)方案如下：

一方面，本發(fā)明提供了一種水稻的白葉枯病抗性的鑒定方法，包括以下步驟：

接種待測水稻和感病水稻；

分離所述待測水稻和所述感病水稻中的miRNA基因；

檢測所述miRNA基因中的miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)；

根據(jù)所述miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)檢測結(jié)果，判定所述待測植株是否抗白葉枯病。

具體地，所述miRNA397a基因位點(diǎn)的序列如序列表中SEQ?ID?NO:1所示。

具體地，將白葉枯菌系P6接種于所述待測水稻和所述感病水稻上。

進(jìn)一步地，所述接種的部位為所述待測水稻和所述感病水稻的葉片。

具體地，接種后2-6小時(shí)，分離所述miRNA基因。

進(jìn)一步地，采用miRNA基因分離試劑盒分離所述miRNA基因。

具體地，采用液相Northern雜交法檢測所述miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)。

進(jìn)一步地，所述液相Northern雜交法所用的探針的序列如序列表中SEQ?ID?NO:2所示，所述探針的5’端標(biāo)記有熒光素FITC。

具體地，判定所述待測植株是否抗白葉枯病的方法為：若所述感病水稻的miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)和所述待測水稻的miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)相等，則所述待測水稻感??；若所述感病水稻的miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)大于所述待測水稻的miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)，則所述待測水稻抗病。

另一方面，本發(fā)明提供了一種miRNA397a基因位點(diǎn)在鑒定水稻的白葉枯病抗性中的應(yīng)用。

本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是：miRNA基因與普通RNA基因不一樣，其序列較短，不容易降解，因此，已經(jīng)在人類疾病如癌癥檢測中得到了應(yīng)用，但利用miRNA基因檢測與診斷植物疾病例子很少，主要是因?yàn)橹参飉iRNA基因的研究相對落后于人類miRNA基因的研究，通過大量樣本的水稻miRNA基因與白葉枯抗性關(guān)系的研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)miRNA397a基因的表達(dá)與白葉枯抗性密切相關(guān)，由此，首次提出miRNA397a基因具有檢測水稻白葉枯抗性的能力，本發(fā)明檢測待測水稻和感病水稻中miRNA397a基因位點(diǎn)的表達(dá)，通過結(jié)果的比對，鑒定待測水稻是否抗白葉枯病，本發(fā)明利用miRNA397a基因位點(diǎn)鑒定水稻是否具有白葉枯病抗性，并獲得了成功，本發(fā)明提供的miRNA397a基因位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄是建立在表達(dá)水平上的檢測，避免了由白葉枯病的抗性基因沉默而造成的誤判，本發(fā)明未利用常規(guī)的DNA連鎖標(biāo)記法，避免了由于DNA連鎖不緊密造成的誤判，提高了檢測的準(zhǔn)確性，避免了不必要的生產(chǎn)損失。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的電泳圖譜。

具體實(shí)施方式