[發明專利]D-二聚體質控品及其制備方法

有效

• 申請號: 201310090638.4
• 申請日: 2013-03-20
• 公開（公告）號: CN103197083A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 謝永華
• 申請（專利權）人: 上海太陽生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術領域

本發明涉及臨床凝血檢驗項目質量控制領域，特別涉及一種采用牛血漿制備D-二聚體質控品的方法。

背景技術

纖維蛋白原是哺乳動物血漿中含量最高的蛋白，在不同的哺乳動物之間具有高度同源性，在動物體內當纖維蛋白原被激活后纖維蛋白凝結塊形成，血液凝固。在血液凝固的同時激活了纖維蛋白溶解系統，它是人體最重要的血液抗凝系統：當纖維蛋白凝結，纖溶酶原激活劑激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，纖維蛋白溶解過程開始，纖溶酶降解纖維蛋白凝結塊形成各種可溶片段，形成纖維蛋白降解產物（FDP），FDP由：X、Y、D-二聚體、中間片段E片段等組成。

D-二聚體是纖維蛋白降解產物中的最小片段，也是交聯纖維蛋白的特異性降解產物，是反映凝血及纖溶活化的分子標志物，正常人血漿中D-二聚體含量甚微，但在伴有血栓和微血栓形成的許多疾病中都可導致D-二聚體的增高，所以它目前是反映體內高凝狀態和繼發纖溶亢進的重要敏感指標之一，也同樣適用于監測血栓形成，纖溶增強及溶栓治療。

隨著D-二聚體檢驗項目不斷拓展到疾病診斷和治療中的各個領域，使用配套的D-二聚體質控品對D-二聚體檢驗進行室內質量控制也顯得尤為重要。目前國內應用的D-二聚體測定室內質控品均為國外進口產品，價格昂貴。也有文獻報道用實驗檢測后剩余血漿來制備D-二聚體質控品，但該方法使用的原料來源為人血漿，不易獲得，不適用于商品化生產。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種采用牛血漿制備D-二聚體質控品的方法及獲得的D-二聚體質控品。本發明方法制備的D-二聚體質控品，對檢測試劑變化敏感性好，且具有較好的穩定性，滿足臨床D-二聚體檢驗的質量控制要求。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種制備D-二聚體質控品的方法，取牛血漿與鈣離子溶液混合，37℃水浴使血液凝固，再加入可降解纖維蛋白的酶，37℃水浴4～8小時使纖維蛋白凝塊溶解，用抑制劑終止反應，獲得D-二聚體母液，使用凍干保護液稀釋母液，冷凍干燥，獲得D-二聚體質控品。

在本發明提供的制備方法中，牛血漿的制備方法為用牛頸靜脈采集的血液，將血液按與抗凝劑以體積比為9:1加入抗凝劑，離心30分鐘，相對離心力為2000～2500g，小心分離吸取上層血漿，即得；抗凝劑為2～5%檸檬酸三鈉。

在本發明提供的制備方法中，鈣離子溶液為0.01～0.05mol/L氯化鈣溶液，加入量為牛血漿體積的30%～70%。

在本發明提供的制備方法中，可降解纖維蛋白的酶為鏈激酶、纖溶酶中的任意一種。

作為優選，可降解纖維蛋白的酶為纖溶酶，加入反應體系后纖溶酶的終濃度為100～300U/mL。

作為優選，抑制劑為抑肽酶，加入反應體系后抑肽酶的終濃度為0.1～1.0μg/mL。

在本發明提供的制備方法中，凍干保護液包括3-三羥甲基甲胺-2-羥基丙磺酸（TAPSO）1～3%（w/v）、氯化鈉1～5%（w/v）、疊氮鈉0.5～3g/L、甘露醇5～20g/L、牛血清白蛋白10～30g/L，抑肽酶10000～100000KIU/L。

本發明還提供了上述方法制備獲得的D-二聚體質控品。

本發明采取以上技術方案，與現有技術相比，具有以下優點：

1、本發明選用牛血漿為原料制備D-二聚體質控品，原料價格低、來源充足、易于獲得，且本發明制備工藝簡單，產品生產成本低。

2、本發明方法制備的質控品，對檢測試劑變化敏感，且凍干品復溶后穩定性更好，可替代進口產品用于D-二聚體檢測的質量控制，保存時間延長，節約使用試劑，降低檢測成本，給工作帶來方便。

附圖說明

圖1示本發明實施例1制備的D-二聚體質控品與市售D-二聚體開瓶穩定性檢測結果；其中，曲線1示本發明實施例1制備獲得的質控品；曲線2示對照組Siemens質控品。

具體實施方式

本發明公開了一種采用牛血漿制備D-二聚體質控品的方法及獲得的D-二聚體質控品，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。

本發明提供的采用牛血漿制備D-二聚體質控品的方法及獲得的D-二聚體質控品中所用原料及試劑均可由市場購得。