[發明專利]制備二肽基肽酶IV抑制劑的方法及用于該制備方法的中間體

有效

• 申請號: 201310089304.5
• 申請日: 2005-04-13
• 公開（公告）號: CN103215320A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 邁克爾.波利蒂諾;馬修.M.卡丁;保羅.M.斯科尼茲尼;賈森.G.陳
• 申請（專利權）人: 布里斯托爾-邁爾斯.斯奎布公司
• 主分類號: C12P13/04
• 分類號: C12P13/04;C12N9/04;C07C271/22;C07C269/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

1.一種制備式2結構的胺的方法，

式2

其包括

a.使用甲酸銨、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、二硫蘇糖醇及部分純化的苯丙氨酸脫氫酶/甲酸脫氫酶(PDH/FDH)處理式1結構的酮酸的水溶液；及

式1

b.使用氫氧化鈉調節反應混合物的pH以形成基本上不含有不希望的過量銨離子的所需的胺。

2.權利要求1的方法，其中進行調節反應混合物的pH的步驟以將反應混合物的pH維持在約7.0至約8.6。

3.權利要求1的方法，其中進行調節反應混合物的pH的步驟以將反應混合物的pH維持在8.0±0.2。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中以這樣的量添加甲酸銨，以提供約1.9:1至約2.5:1的范圍內的甲酸銨:式1酸的摩爾比例。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中以這樣的量添加煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，以提供約500:1至約1500:1的范圍內的NAD:式1酸的摩爾比例。

6.權利要求1-5中任一項的方法，其中步驟c的反應混合物維持在約25℃至45℃的范圍內的溫度。

7.權利要求1的方法，其中將該3-羥基-α-酮基三環[3.3.1.1^3,7]癸烷-1-乙酸、甲酸銨、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、二硫蘇糖醇及部分純化的苯丙氨酸脫氫酶/甲酸脫氫酶的水溶液加熱到約35至約40℃的溫度且將其pH維持在約7.8至約8.2的范圍內達約24至約48小時，以制備該胺。

8.一種制備式3結構的經BOC-保護的胺的方法

式3

其包括

a.提供下述結構的氨基酸(αS)-α-氨基-3-羥基三環[3.3.1.1^3,7]癸烷-1-乙酸的水溶液

其是根據權利要求1-7中任一項的方法而制備的，及

b.使用二碳酸二叔丁酯處理上述水溶液以形成該經BOC-保護的胺。

9.權利要求8的方法，其中該(αS)-α-氨基-3-羥基-三環[3.3.1.1^3,7]癸烷-1-乙酸的水溶液和二碳酸二叔丁酯的混合物的pH維持在約8.5至約12.5的范圍內。

10.權利要求8的方法，其進一步包括從該反應混合物中離析該經BOC-保護的胺且對該經BOC-保護的胺進行結晶的步驟。

11.權利要求1-10中任一項的方法，其中部分純化的苯丙氨酸脫氫酶/甲酸脫氫酶(PDH/FDH)是通過包括下述的方法制備的：

a.制備能夠產生苯丙氨酸脫氫酶和/或甲酸脫氫酶的微生物的發酵培養液；

b.對該培養液進行微流體化以從所得的細胞中釋放出活性且形成含有PDH及/或FDH酶的微流體化的培養液；

c.經由使用絮凝劑處理該培養液以凝結細胞碎屑而澄清該培養液，并除去DNA和不需要的蛋白質；

d.過濾該澄清的培養液；及

e.濃縮該培養液以得到具有對于PDH為至少約400IU/毫升和對于FDH為至少約20IU/毫升的PDH/FDH活性的經純化的酶濃縮物。

12.權利要求11的方法，其中在保持該培養液的溫度低于約40℃的同時對該培養液進行微流體化。

13.權利要求12的方法，其中保持該培養液的溫度在約4℃至約30℃的范圍內。