[發明專利]基于移動反應界面電泳的高通量蛋白質滴定方法

無效

• 申請號: 201310089084.6
• 申請日: 2013-03-20
• 公開（公告）號: CN103175885A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 曹成喜;王后禹;郭成葉;顏健;唐蕓蕓;尹曉陽;樊柳蔭
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N27/44
• 分類號: G01N27/44
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王毓理;王錫麟

技術領域

本發明涉及的是一種電化學方法分析材料的方法，具體是一種用于生物樣品中蛋白質含量檢測的基于移動反應界面（moving?reaction?boundary,MRB）電泳的高通量蛋白質滴定方法。

背景技術

蛋白質是食品（如牛奶）中的主要營養成分之一。檢測食品中蛋白總含量對于衡量食品營養價值、判定商品價格、評定食材質量等方面有很大的意義(Moore,J.C.,DeVries,J.W.,Lipp,M.,Griffiths,J.C.,Abernethy,D.R.,2010,Comper.Rev.FoodSci.Food?Saf.,9,330-357.)。并且蛋白質含量分析在臨床醫學診斷中具有重要應用（康熙熊，臨床電泳，人民衛生出版社，2006年）。凱氏定氮法已成為各種生物樣品蛋白含量標準方法之一（Kjeldahl,J.Z.,1883,Anal.Chem.,22,366-382.），其他方法還有Dumas法(Thudichum,J.L.?W.,Wanklyn,J.A.,1869,J.Chem.Soc.,22,277-292.)、染料結合法(Colenbrander,V.F.,Martin,T.G..1971,J.DairySci.,54,531-533)、光譜法(Kennedy,J.F.,White,C.A.,Browne,A.,1985,J.FoodChem.,18,95-112.)等。其中凱氏定氮法和Dumas法都容易受非蛋白氮（non?protein?nitrogen,NPN）的影響。許多不法分子在食品中添加NPN（如三聚氰胺、尿素），如若用凱氏定氮法或Dumas法檢測已添加NPN的食品的蛋白質含量，會導致測得結果比實際值高(Moore,J.C.,DeVries,J.W.,Lipp,M.,Griffiths,J.C.,Abernethy,D.R.,2010,Comper.Rev.Food?Sci.Food?Saf.,9,330-357.)。而三聚氰胺的過多攝入會引起腎結石、血尿，最后導致急性腎功能衰竭(Lam,C.W.,Lan,L.,Che,X.,Tam,S.,Wong,S.S.Y.,Chen,Y.,Jin,J.,Tao,S.H.,Tang,X.M.,Yuen,K.Y.,2009,Clin.Chim.Acta,402,150-155.)。尿素的添加會降低食品營養價值，甚至影響人類身體健康(Trivedi,U.,Lakshminarayana,D.,Kothari,I.,Patel,N.,Kapse,H.,Makhija,K.,Patel,P.,Panchal,C.,2009,Sensor?Actuator.B-Chem.,140,260-266.)。因此，有必要提出一種既可以準確測定蛋白含量，又不受NPN影響的測定食品等樣品中蛋白含量的可靠方法。

目前已經有一些分析方法可以減少NPN的影響，測定復雜樣品中的某種特定的蛋白質，如親和色譜法(Goshe,M.B.,Conrads,T.P.,Panisko,E.A.,Angell,N.H.,Veenstra,T.D.,Smith,R.D.,2001,Anal.Chem.,73,2578-2586.)、親和毛細管電泳法(Armenta,J.M.,Gu,B.,Humble,P.H.,Thulin,C.D.,Lee,M.L.,2005,J.Chromatogr.A,1097,171-178.)、生物傳感器(Setford,S.J.,White,S.F.,Bolbot,J.A.,2002,Biosens.Bioelectron.,17,79-86.)等。盡管這些方法可以排除NPN的影響，但它們的專一性導致只能測定樣品中的一種或幾種蛋白質，但對總蛋白含量的準確度不是很高。除此之外，這些方法往往需要昂貴的儀器設備，操作復雜，測定時間較長。