[發(fā)明專(zhuān)利]一種融合基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310088364.5
• 申請(qǐng)日: 2013-03-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103160530B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐建青;黃楊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州工業(yè)園區(qū)唯可達(dá)生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/62
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C07K19/00;A61K48/00;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11280
• 代理人: 郭廣迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種融合基因，尤其涉及一種含有信號(hào)肽的融合基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

1.核酸疫苗

核酸疫苗或DNA疫苗，是指將編碼外源性抗原的基因插入到真核表達(dá)載體上，然后直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白，該抗原蛋白可直接誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。抗原基因在一定時(shí)限內(nèi)的持續(xù)表達(dá)，不斷刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)，從而達(dá)到預(yù)防疾病的目的。DNA疫苗可分別活化機(jī)體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生特異性的抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答。與傳統(tǒng)疫苗相比，DNA疫苗具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、質(zhì)粒DNA非常穩(wěn)定，易于貯存和運(yùn)輸，使用方便。而且制備簡(jiǎn)單，容易大量生產(chǎn)，成本低。2、質(zhì)粒DNA在宿主體內(nèi)可較長(zhǎng)時(shí)間存在，抗原基因在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)產(chǎn)生抗原蛋白，不斷刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生長(zhǎng)程免疫，免疫效果可靠。3、基因疫苗不僅可以產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，而且可以導(dǎo)致細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞激活而誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，而傳統(tǒng)的疫苗只有活苗可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，但存在活疫苗的毒力回升的危險(xiǎn)。4、用核心蛋白保守DNA序列制備的基因疫苗對(duì)病原體（細(xì)菌或病毒）的各變異亞型都可產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而避免因病原體變異而造成的免疫逃避問(wèn)題。5、一個(gè)質(zhì)粒載體可克隆多個(gè)抗原基因組成多價(jià)苗，從而一種基因疫苗可預(yù)防多種疾病。6、質(zhì)粒DNA無(wú)免疫原性，不會(huì)像重組疫苗那樣誘發(fā)針對(duì)載體的自身免疫反應(yīng)。

盡管有上述優(yōu)點(diǎn)，但整體而言，DNA疫苗免疫原性較常規(guī)疫苗制品（如蛋白疫苗、滅活疫苗）弱，需要新型載體或佐劑輔助，以提高免疫應(yīng)答。

2.信號(hào)肽

另外，某些病原體抗原（比如腸道病毒71型VP1）不具有信號(hào)肽，不能分泌性表達(dá)，因而直接表達(dá)此類(lèi)抗原基因的核酸疫苗限于細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，未能充分與MHC II類(lèi)分子結(jié)合，影響Th2型特異性細(xì)胞免疫，從而影響了針對(duì)此類(lèi)抗原的抗體應(yīng)答。因此，開(kāi)發(fā)能高效分泌性表達(dá)的信號(hào)肽有助于提高活化抗體應(yīng)答。

另一方面，基因治療有時(shí)也會(huì)涉及分泌型表達(dá)，某些細(xì)胞因子自身攜帶的信號(hào)肽序列可能基于天然的原因，并非能高效分泌表達(dá)產(chǎn)物，但涉及該細(xì)胞因子的基因治療卻需要高效分泌形式的表達(dá)，因而，將該細(xì)胞因子信號(hào)肽序列替換為高效分泌的信號(hào)肽序列，也有助于提高基因治療的效果。

關(guān)于信號(hào)肽基因用于核酸疫苗的研究也廣泛記載于已有文獻(xiàn)中。早在核酸免疫研究開(kāi)始時(shí)，就有研究人員探討了信號(hào)肽融合抗原的核酸免疫效果。Wagener等將異源信號(hào)肽基因與猴免疫缺陷病毒（SIV）抗原融合，并活化產(chǎn)生了針對(duì)SIV抗原的抗體應(yīng)答（J.Biotechnol.44,59-65.1996）。Letvin等將纖溶酶原激活物（tissue plasminogen activator，tPA）信號(hào)肽與人免疫缺陷病毒（HIV）包膜糖蛋白gp120和gp160分別融合，形成嵌合基因疫苗載體，該疫苗載體能活化產(chǎn)生較好的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答（PNAS.94,9378-9383.1997）。

但是tPa信號(hào)肽融合對(duì)抗體應(yīng)答的效果是不穩(wěn)定的，有時(shí)tPA無(wú)法達(dá)到提高抗體應(yīng)答的效果。Li等研究tPA信號(hào)肽對(duì)結(jié)核抗原免疫原性的影響，發(fā)現(xiàn)對(duì)tPA信號(hào)肽對(duì)部分抗原有效果，能顯著提高體液免疫應(yīng)答（INFECTION AND IMMUNITY.67,4780-4786.1999）。Haddad等對(duì)比了tPA信號(hào)肽融合與否對(duì)抗體應(yīng)答的效果，然而其結(jié)果表明，tPA信號(hào)肽與目的抗原融合并未增強(qiáng)抗體的應(yīng)答水平（FEMS Immunology and Medical Microbiology.18,193-202.1997）。

同時(shí)，信號(hào)肽對(duì)核酸疫苗免疫原的影響多數(shù)集中在tPA的研究上，其他的信號(hào)肽應(yīng)用較少，目前還很少有高效的其他信號(hào)肽用于核酸疫苗的研究。方艷輝等（中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，第3期，2004）記載了人IL-2信號(hào)肽基因增強(qiáng)了柯薩奇病毒B3型VP1DNA疫苗誘導(dǎo)的中和抗體應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容