[發明專利]一種小花蜘蛛抱蛋組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310087997.4
• 申請日: 2013-03-19
• 公開（公告）號: CN103168686A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張占江;李翠;韋坤華;繆劍華;李林軒;韋瑩;凌征柱
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術領域

本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種小花蜘蛛抱蛋組織培養快速繁殖方法。?

背景技術

小花蜘蛛抱蛋,為百合科植物小花蜘蛛抱蛋（Aspidistra?minutiflora?Stapf?in?Journ.Linn.）。多年生常綠草本，根狀莖直徑約6毫米，具密節和鱗片。分布于我國亞熱帶地區廣西、廣東和貴州三省，以廣西分布最多。生于路旁或山腰之花崗巖或石灰巖上。辛、苦，寒。肺、肝二經。有清熱止咳，續傷接骨的功效。可用于痰熱咳嗽，用于跌撲閃挫，金瘡，損傷溺骨等證。?

小花蜘蛛抱蛋花色褐紫色或淡綠色，具有較高的園林觀賞和一定的藥用價值，近年來其資源遭到了嚴重破壞，且對生長環境要求十分苛刻，一般僅正常出現在保存較好的原生林內，對群落植物、光線、濕度、土壤和地被層均有不同程度的特殊要求。隨著市場需求量的不斷增加，野生小花蜘蛛抱蛋資源瀕臨枯竭了，生產上難以實現大面積栽培。采用生物技術組織培養技術，可以有效快速地提高小花蜘蛛抱蛋種苗的繁殖速度和質量，實現小花蜘蛛抱蛋優質種苗的工廠化育苗，以滿足生產上的需要。?

發明內容

本發明的目的是提供一種小花蜘蛛抱蛋組織培養快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優良小花蜘蛛抱蛋種苗。?

本發明通過以下技術方案達到上述目的：一種小花蜘蛛抱蛋組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：?

（1）外植體的選擇與消毒：取小花蜘蛛抱蛋側芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來水沖洗10-20min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水，?

（2）側芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養：將步驟（1）得到的外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-26°C，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下?培養30天，側芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，?

（3）叢生芽壯苗培養：將步驟（2）中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養基中，在培養溫度23-26°C，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，?

（4）健壯植株生根培養：將步驟（3）中得到的健壯植株置于MS生根培養基中，在培養溫度23-26°C，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，?

（5）煉苗與移栽：步驟（4）獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質形成后將苗取出，洗凈根部培養基，立即移栽到通風良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生長一個半月后移栽大田。移栽后一個星期內，每天早8點到晚6點噴霧3-5次，每次10min，此后每天早8點、晚6點各噴霧1次，每次10min；移栽時的溫度條件為20-28°C，相對濕度75-80%，遮陽率為70%。?

本發明的突出優點在于：?

（1）本發明通過生物技術對小花蜘蛛抱蛋進行組織培養快速繁殖，在短時間內培育出大量可供大田栽培的小花蜘蛛抱蛋幼苗，顯著提高了小花蜘蛛抱蛋種苗的繁殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。?

（2）在MS繁殖培養基中添加1.0-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA和0.1-0.4mg/L的激動素KT可促進叢生芽的分化；添加濃度為0.5-1.5mg/L的生長激素萘乙酸NAA可促進叢生芽的生長；?

在MS壯苗培養基中添加濃度為1.5mg/L的6-BA和0.2-0.6mg/L的吲哚乙酸IAA可促進叢生芽葉片的展開；?

在MS生根培養基上組合使用濃度為2.0mg/L的吲哚丁酸IBA和1.0mg/L的生長素IAA，可獲得帶根的完整植株，這些植株經煉苗后可直接移栽沙床。?