[發(fā)明專利]一種快速、無性繁殖百脈根的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310087695.7
• 申請(qǐng)日: 2013-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN103141392A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓陽;婁虹;盧福榮;段雅楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 沈陽杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種快速、無性繁殖百脈根的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

百脈根(?Lotus?corniculatus?L.)又名牛角花、五葉草和鳥趾草，是豆科百脈根屬多年生草本植物，是世界著名的優(yōu)良豆科牧草之一，也是一種常見的庭院觀賞植物。百脈根原產(chǎn)歐亞濕潤地區(qū)，目前在歐洲、美洲、澳洲及南亞等地均有種植，我國華南、西南、西北、華北、東北等地均有分布，是我國溫暖濕潤地區(qū)極具潛力的優(yōu)良牧草。百脈根作為一種優(yōu)質(zhì)豆科牧草，具有耐寒、耐澇、耐貧瘠、耐踐踏、耐旱等優(yōu)點(diǎn)，即使在貧瘠的山坡上也能很好的生長(zhǎng)，是改良草地的優(yōu)良牧草。它作為家畜飼用的材料具有營養(yǎng)豐富、采食率高、口感好、蟲害少等優(yōu)點(diǎn)，其莖葉柔軟細(xì)嫩多汁，適口性好，各類家畜均喜食。百脈根營養(yǎng)居豆科牧草的首位，特別是莖葉保存養(yǎng)分的能力很強(qiáng)，在成熟收種后，蛋白質(zhì)含量仍可達(dá)17.4%，品質(zhì)仍佳。百脈根可刈割青飼，可調(diào)制青干草，加工草粉和混合飼料，還可用作放牧利用。用于青飼或放牧?xí)r，其青綠期長(zhǎng)，含皂素低，耐牧性強(qiáng)，不會(huì)引起家畜膨脹病，為一般豆科牧草所不及，是牛、馬、兔等家畜的優(yōu)良飼料。因其耐熱，夏季一般牧草生長(zhǎng)不良時(shí)，百脈根仍能良好生長(zhǎng)，延長(zhǎng)利用期。?

百脈根根系發(fā)達(dá)，側(cè)根旁生眾多根瘤，根茬地翻耕后能增加土壤有機(jī)質(zhì)和氮素，改土肥田效果好，對(duì)后作增產(chǎn)作用大，常與禾谷類糧草料及油料、經(jīng)濟(jì)作物輪作倒茬利用。其莖枝匍匐生長(zhǎng)，枝葉茂密，覆蓋度大，在荒坡裸地種植，護(hù)坡保持水土性能好；花期長(zhǎng)，昆蟲傳粉，是很好的蜂蜜來源植物。百脈根，根系發(fā)達(dá)，可以起到很好的防風(fēng)固沙、保持水土的作用。

百脈根在許多基因工程研究和作物育種方面也有著重要的意義，特別是可以作為外源基因的轉(zhuǎn)入、牧草品質(zhì)的改良、生物固氮機(jī)制及原理研究的良好材料。盡管百脈根有許多優(yōu)點(diǎn)，但大多數(shù)栽培品種苗期生長(zhǎng)緩慢和抗逆性差，花期、果期的時(shí)間較長(zhǎng)，使得百脈根產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)有許多不便。因此，在常規(guī)育種的基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)其加以遺傳基因改良，以培育出優(yōu)質(zhì)、?高產(chǎn)的新品種，對(duì)擴(kuò)大優(yōu)質(zhì)百脈根的生產(chǎn)和我國未來草業(yè)的發(fā)展具有深遠(yuǎn)意義。

現(xiàn)有百脈根的無性繁殖技術(shù)存在的問題是，繁殖時(shí)間長(zhǎng)，獲得一代無性繁殖體通常需70～90d時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以子葉為材料，從外植體直接發(fā)生不定芽的快速、無性繁殖百脈根的方法，通過該方法能在40～50d內(nèi)，獲得一代百脈根無性繁殖后代。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：一種快速、無性繁殖百脈根的方法，步驟如下：

1)??????將百脈根子葉滅菌后，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件為25±1℃，每日光照16h，光強(qiáng)30umol^-2s^-1，培養(yǎng)至發(fā)生不定芽；所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，優(yōu)選的，是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，每升基本培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤0.5mg?，按重量百分比添加3%的蔗糖和0.7%的瓊脂，調(diào)節(jié)pH為5.8。

2)??????當(dāng)不定芽長(zhǎng)至?2～3?c?m?時(shí)，從其基部切下，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基生根；所述的生根培養(yǎng)基，優(yōu)選的，是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，每升基本培養(yǎng)基中添加α-萘乙酸0.1mg，按重量百分比添加3%的蔗糖和0.7%的瓊脂，調(diào)節(jié)pH為5.8。

3)?????當(dāng)生根苗的根長(zhǎng)至2～3cm時(shí)，打開瓶口煉苗，然后移栽到混合好的基質(zhì)中；所述的基質(zhì)，優(yōu)選的，是按重量比，栽培土:草炭:蛭石=1:1.5-2.5:0.5-1.5。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：本發(fā)明采用植物組織培養(yǎng)方法，以子葉為材料，不經(jīng)過愈傷組織階段，直接誘導(dǎo)不定芽的形成，而且采用的生根方法能在20d內(nèi)，誘導(dǎo)不定芽形成完整根系。獲得一代無性繁殖后代只需40～50d。本發(fā)明為百脈根的快速繁殖提供了可行的手段。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1?：一種快速、無性繁殖百脈根的方法

步驟如下：

1、外植體消毒及不定芽的誘導(dǎo)