[發明專利]新型腸粘膜提取高純度肝素鈉工藝

無效

• 申請號: 201310087645.9
• 申請日: 2013-03-19
• 公開（公告）號: CN103130916A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 費蘋;陳銀芳;費正明;陳明全
• 申請（專利權）人: 如皋市永興腸衣有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

????本發明涉及一種生物藥用原料的制備純化方法，屬于生物工程領域，具體是一種制備高純度低分子肝素鈉的工藝。

??背景技術

????肝素鈉是一種富含陰離子的粘多糖硫酸酯，由動物體內的肥大細胞和嗜堿性粒細胞產生，因最初從肝臟中提取，故名肝素。臨床使用的肝素是從動物腸、肺粘膜、血管壁等處提取獲得的鈉(鋰)鹽，肝素鈉(鋰)具有抗凝血、抗炎、抗癌等多種生物學功能，但長期使用會有諸如出血、骨折等負作用。20世紀80年代初期發現低分子肝素鈉(LMWH，(8000Da)具有更強的活性和較小負作用，成為主要的臨床抗凝血藥。

?目前國外已有10多種LMWH相繼問世，全球四大制藥企業均有該類產品的銷售，我國是主要的肝素原料國，產量約占全球的一半。應用于臨床的LMWH是由普通肝素為原料制備獲得，制備方法主要有生物酶法、化學裂解法兩種。它們各有優勢，肝素酶降解反應條件

??溫和、專一性高、副產物少而且引入一個紫外生色團，檢測方便，但酶的價格昂貴，難以跨越工業生產的界線。化學裂解法不可避免的會改變肝素鈉的結構、影響活性等。中國專利(授權號CNl096034)公開了一種純化的肝素裂分其制備方法和含有它們的藥物組合物。純化

??的肝素裂分通過如下步驟制備：向肝素鈉中加入亞硝酸鹽，pHl—5處理20—50分鐘，再在堿介質中以硼氫化鈉還原，用HCL破壞過量硼氫化鈉并用乙醇沉淀分級，將得到的溶液暴露在紫外照射系統下，溫度為5℃一50℃，pH為3—8，色譜純化，最后用氯化鈉和乙醇沉淀分離得降解肝素鈉。美國專利(公開號3099600)公開了一種色譜技術分離純化肝素鈉的方法：將肝素鈉粗品溶于緩沖溶液中，加入5—12倍肝素鈉重量的離子交換樹脂TEAM-c01lulose或DEAE-c01lulose，后用緩沖液洗滌，鹽洗脫，乙醇沉淀、干燥得產品。上述方法為工業上典型的制備及純化肝素鈉的過程，生產工藝復雜、成本高，而且沒有提及對肝素鈉的結構類似物多硫酸軟骨素這一主要雜質的去除方法。

??發明內容

????本發明的目的為了改進現有技術的不足而提供一種制備高純度低分子肝素鈉的工藝；該發明提供一種簡便的低分子肝素鈉制備、純化技術，制得的低分子肝素鈉平均分子質量在4．5KDa左右，效價不低于180U／mg，高于中國藥典要求的170U／mg，且依據中國藥典肝素鈉檢測標準檢測合格。

????本發明的技術方案為：一種制備高純度低分子肝素鈉的工藝，其具體步驟如下：

?????(1)將粗品肝素鈉溶于NaCl溶液中，機械攪拌至肝素鈉全部溶解，向溶液中加入?堿液直至產生沉淀，靜置，過濾除去不溶物，得濾液；

????(2)將步驟(1)中濾液以堿液調pH至9．5—10．5，加入H202溶液，在10—30℃下?反應2．5—3．5小時，得反應液；

(3)將步驟(2)得到的反應液升溫至30—50℃，此后每隔2．5—3．5小時補加H20：

?(4)向步驟(3)得到的反應液中加入吸附劑，磁力攪拌，過濾除不溶物，得濾液；

????(5)將步驟(4)中的濾液通過平衡好的凝膠色譜柱，收集低分子量的肝素鈉洗脫液；

????(6)將步驟(5)中的低分子量的肝素鈉洗脫液用弱堿性離子交換樹脂吸附，分別以三種濃度的NaCl溶液洗脫，收集第一種(最低)、第三種(最高)濃度的NaCl洗脫液并混合；

????(7)將步驟(6)中的混合洗脫液，在磁力攪拌下降溫至一5—8℃，再用乙醇沉淀、真空干燥得產品。

????步驟(1)中NaCl溶液的質量百分濃度為1．2—1．8％；NaCl溶液的用量為2—3mL／g肝素鈉粗品量；靜置時間1—2小時。

????步驟(1)和(2)的堿液均為NaOH或KOH溶液；堿液的濃度為1—1．5mOl/L。

????步驟(2)和(3)中所加入的H202溶液和NaCl溶液的體積比為3—5：100；步驟(2)中H202溶液的濃度為1—5mOl/L，步驟(3)中H202溶液的濃度為1—3mOl/L。

????步驟(3)中每次補加完H20：溶液后測定pH，使pH在6．8—7．5之間。

????步驟(4)中所述的吸附劑為活性碳、皂土或硅酸鹽；吸附劑的加入量為3—5g／100mlNaCl溶液量。