1.一種雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟诎ㄒ韵虏襟E：

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取一定質(zhì)量吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液；

（2）提取：稱取煙葉樣品置于錐形瓶中，加入煙草樣品的3~30倍甲醇，經(jīng)振蕩后過(guò)濾，濃縮近干；

（3）凈化：濃縮瓶中殘留物用水溶解，轉(zhuǎn)入甲醇、水預(yù)淋洗的C18固相小柱中，甲醇-水混合溶液淋洗，甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，加入甲醇-二氯甲烷混合溶液重新溶解，轉(zhuǎn)入甲醇-二氯甲烷混合溶液預(yù)淋洗的PSA固相小柱中，甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脫，收集流出液，濃縮，定容；

（4）檢測(cè)：待儀器穩(wěn)定后，用步驟（1）配制的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，液相色譜檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)步驟（3）收集的凈化樣品進(jìn)行液相色譜檢測(cè)；

（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（6）結(jié)果分析：按以下公式計(jì)算試樣中吡蚜酮的含量

R=

R—樣品中吡蚜酮?dú)埩袅浚瑔挝籱g/kg；

C₁—標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位mg/L；

V₁—標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，單位μL；

V₂—樣品溶液最終定容體積，單位mL；

V₃—樣品溶液進(jìn)樣體積，單位μL；

S₁—標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰高，AU；

S₂—樣品溶液的峰高，AU；

W—樣品稱取質(zhì)量，單位g。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（3）中的甲醇-水混合溶液，是指甲醇和水體積比為5:95的混合溶液；所述甲醇-二氯甲烷混合溶液，是指甲醇和二氯甲烷體積比5:95的混合溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（4）中的液相色譜檢測(cè)采用高效液相色譜儀-二極管陣列檢測(cè)器，Waters?Alliance?2695/2487，色譜柱：Waters?X-Brige，C18柱，5.0?μm，4.6×250?mm；檢測(cè)條件：

流動(dòng)相：乙腈/水溶液，V:V?為15:85至80:20；

流速：0.8ml/min；

測(cè)定波長(zhǎng)：298?nm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10?μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（1）中的吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，是指稱取0.01?g吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容至100?mL，制成100?mg/L儲(chǔ)備液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（1）中的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液是指0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0?mg/L的吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（2）中的煙葉樣品，是指鮮煙葉、干煙葉中的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（2）中的樣品置于錐形瓶，是指2~20?g樣品置于250?mL?錐形瓶。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟冢核霾襟E（2）和（3）中的濃縮，是指用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取樣品在40℃~50℃的范圍內(nèi)濃縮近干。