[發(fā)明專(zhuān)利]培育高含硫氨基酸的轉(zhuǎn)基因苜蓿的方法及其專(zhuān)用材料

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310086277.6
• 申請(qǐng)日: 2013-03-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103215305A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王濤;仝宗永;董江麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/82
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/82;A01H5/00;C12N9/12;C12N9/02;C12N15/62
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.培育氨基酸含量改變的轉(zhuǎn)基因苜蓿的方法，包括向受體苜蓿中導(dǎo)入天冬氨酸激酶編碼基因和腺苷硫酸還原酶編碼基因，得到氨基酸含量改變的轉(zhuǎn)基因苜蓿；

所述轉(zhuǎn)基因苜蓿具有下述1）-4）中的全部特性或至少一種特性：

1）所述轉(zhuǎn)基因苜蓿與所述受體苜蓿相比，甲硫氨酸含量提高；

2）所述轉(zhuǎn)基因苜蓿與所述受體苜蓿相比，半胱氨酸含量提高；

3）所述轉(zhuǎn)基因苜蓿與所述受體苜蓿相比，天冬氨酸含量提高；

4）所述轉(zhuǎn)基因苜蓿與所述受體苜蓿相比，賴(lài)氨酸含量提高；

所述天冬氨酸激酶是如下a）或b）的蛋白質(zhì)：

a）氨基酸序列如SEQ?ID?No.2第65-512位所示的蛋白質(zhì)；

b）將SEQ?ID?No.2第65-512位經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基得到的具有天冬氨酸激酶活性的由a）衍生的蛋白質(zhì)；

所述腺苷硫酸還原酶是如下c）或d）的蛋白質(zhì)：

c）氨基酸序列如SEQ?ID?No.4第65-330位所示的蛋白質(zhì)；

d）將SEQ?ID?No.4第65-330位經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基得到的具有腺苷硫酸還原酶活性的由c）衍生的蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶編碼基因?yàn)槿缦?）或2）或3）或4）所示的基因，和/或所述腺苷硫酸還原酶為如下5）或6）或7）或8）所示的基因：

1）編碼所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

2）其編碼序列是SEQ?ID?No.1的第1196-2542位核苷酸的DNA分子；

3）在嚴(yán)格條件下與1）限定的DNA分子雜交且編碼所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

4）與1）限定的DNA分子具有90％以上的同源性且編碼所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

5）編碼所述腺苷硫酸還原酶的DNA分子；

6）其編碼序列是SEQ?ID?No.3的第1196-1996位核苷酸的DNA分子；

7）在嚴(yán)格條件下與1）限定的DNA分子雜交且編碼所述腺苷硫酸還原酶的DNA分子；

8）與1）限定的DNA分子具有90％以上的同源性且編碼所述腺苷硫酸還原酶的DNA分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶編碼基因和腺苷硫酸還原酶編碼基因通過(guò)天冬氨酸激酶編碼基因和腺苷硫酸還原酶編碼基因表達(dá)載體導(dǎo)入所述受體苜蓿；所述天冬氨酸激酶編碼基因和腺苷硫酸還原酶編碼基因表達(dá)載體含有天冬氨酸激酶編碼基因表達(dá)盒和腺苷硫酸還原酶編碼基因表達(dá)盒；所述天冬氨酸激酶編碼基因表達(dá)盒包括啟動(dòng)子1和由所述啟動(dòng)子1啟動(dòng)的葉綠體引導(dǎo)肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因和終止所述葉綠體引導(dǎo)肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因轉(zhuǎn)錄的終止子1；所述葉綠體引導(dǎo)肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因是所述天冬氨酸激酶編碼基因與所述葉綠體引導(dǎo)肽基因相連接形成的融合基因，所述葉綠體引導(dǎo)肽基因位于所述天冬氨酸激酶編碼基因的上游；

所述腺苷硫酸還原酶編碼基因表達(dá)盒包括啟動(dòng)子2和由所述啟動(dòng)子2啟動(dòng)的葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合基因和終止所述葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合蛋白基因轉(zhuǎn)錄的終止子2；所述葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合蛋白基因是所述腺苷硫酸還原酶編碼基因與所述葉綠體引導(dǎo)肽基因相連接形成的融合基因，所述葉綠體引導(dǎo)肽基因位于所述腺苷硫酸還原酶編碼基因的上游。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示，所述葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述葉綠體引導(dǎo)肽天冬氨酸激酶融合基因序列如SEQ?ID?No.1的第1004-2542位所示；所述葉綠體引導(dǎo)肽腺苷硫酸還原酶融合基因序列如SEQ?ID?No.3的第1004-1996位所示；所述啟動(dòng)子1和啟動(dòng)子2均是35s，所述終止子1和所述終止子2均是ocs。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶編碼基因表達(dá)盒的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示；腺苷硫酸還原酶編碼基因表達(dá)盒的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。