[發(fā)明專利]豬氣喘病、豬傳染性胸膜肺炎及豬肺疫三聯(lián)檢測試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310083886.6
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103941014A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李學(xué)伍;趙東;鄧瑞廣;王麗;楊繼飛;柴書軍;邢廣旭;張改平
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
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一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是一種涉及豬氣喘病、豬傳染性胸膜肺炎及豬肺疫檢測試劑顯示器具，特別是涉及一種可同時檢測豬氣喘病、豬傳染性胸膜肺炎及豬肺疫的三聯(lián)檢測試紙條。

二、技術(shù)背景

豬肺疫又稱豬巴氏桿菌病、鎖喉風(fēng)，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種急性傳染病。主要特征為敗血癥，咽喉及其周圍組織急性炎性腫，或表現(xiàn)為肺、胸膜的纖維蛋白滲出性炎癥。急性的常呈敗血癥病變，死亡率高，慢性的多與豬氣喘病、豬瘟等混合感染或繼發(fā)。本病是危害養(yǎng)豬業(yè)的常見傳染病，分布很廣，常繼發(fā)于其他傳染病，造成嚴(yán)重的經(jīng)經(jīng)濟(jì)損失。

豬傳染性胸膜肺炎是由豬胸膜肺炎放線桿菌引起豬的一種急性、熱性、高度傳染性的呼吸道疾病。臨床上以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。本病分布于世界許多國家和地區(qū)，是一種世界性疾病，目前呈上升的流行趨勢，給規(guī)模化養(yǎng)豬場造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。

豬氣喘病又稱豬支原體肺炎是由豬肺炎支原體引起的一種慢性、接觸性傳染病，是一種重要的免疫抑制性疾病，也是豬呼吸道疾病綜合征的重要病原之一。該病長期危害養(yǎng)豬業(yè)，并廣泛分布于世界各國。臨床上以咳嗽和氣喘為主要癥狀，以融合性支氣管肺炎為主要病變特征。主要危害是引起豬的生長受阻和飼料轉(zhuǎn)化率大幅下降，高的發(fā)病率使其嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。本病一旦傳入豬群，很難清除。因此，對該病流行病學(xué)的認(rèn)識以及診斷技術(shù)的研究和應(yīng)用具有十分重要的意義。

豬氣喘病、豬傳染性胸膜肺炎及豬肺疫是一類嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的呼吸道疾病，上述疾病疫苗預(yù)防效果不佳，隨著耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，其治療效果也不斷下降。臨床癥狀相似，鑒別診斷困難，給此類疾病的控制帶來了難度。快速鑒別檢測可為發(fā)病豬群的治療和病原體的清除提供科學(xué)依據(jù)，是控制和消滅上述疾病的有效方法。目前對上述疾病的診斷方法主要有以下幾種。

（1）病原體的分離培養(yǎng)與鑒定：豬肺炎支原體的分離培養(yǎng)十分困難，且生長緩慢，往往需要10d左右才能觀察到細(xì)小的菌落。豬肺炎支原體的菌落很小，典型的菌落為圓形，邊緣整齊，灰白色，半透明，中間凸起呈乳頭狀，表面常有許多小的顆粒，菌落大小在100～300nm?之間。在做液體培養(yǎng)時，可通過酚紅指示劑能否使培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化而判斷有無菌體的生長，或?qū)⒁后w培養(yǎng)物作涂片，進(jìn)行姬姆薩染色或瑞特氏染色，鏡檢觀察。若有豬肺炎支原體感染，可見環(huán)狀、電燈泡狀等菌體結(jié)構(gòu)。

豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌分離培養(yǎng)，從新鮮的支氣管、鼻腔分泌物或肺部病變分離病原體，無菌取病料接種于含5％綿羊血的瓊脂平板上，并劃十字線接種，在5％CO₂培養(yǎng)箱中37℃?過夜培養(yǎng)后，見有1～1.5mm?圓形、中間凸起、邊緣整齊、灰白色半透明菌落，菌落周圍出現(xiàn)清晰的完全溶血環(huán)。對分離到的病原菌進(jìn)行鏡檢，菌體呈革蘭氏陰性，球桿狀或細(xì)小桿菌，有時形成絲狀，多形性，不形成芽孢，無運動性，有莢膜。

豬肺疫巴士桿菌分離培養(yǎng)，采取病料接種于麥康凱瓊脂和血液瓊脂平板，置于37℃恒溫箱中，進(jìn)行分離培養(yǎng)。在血液瓊脂平板上生長，培養(yǎng)24h后，可長成淡灰白色，圓形、濕潤、不溶血的露珠樣小菌落。涂片染色鏡檢，為革蘭氏陰性、兩極濃染的小球桿菌。

（2）血清學(xué)檢測：血清學(xué)檢測是一種傳統(tǒng)的檢測方法，它是通過檢測血清中抗體水平來判斷豬是否患有上述疾病，主要包括間接血凝試驗(IHA)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(CFT)、免疫熒光試驗(IF)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以及放射免疫酶試驗(RIDEA)。

（3）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)：PCR技術(shù)具有高靈敏度、高特異性等優(yōu)點，已被廣泛運用于許多疾病的病原體鑒定和流行病學(xué)調(diào)查。上述疾病的病原體檢測均可使用PCR技術(shù)，PCR檢測病原體與ELISA檢測相比，其檢出率明顯高于ELISA的檢測率。

病原體培養(yǎng)與鑒定、血清學(xué)檢測、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)，需要專業(yè)人員在實驗室操作，操作繁瑣，檢測費時費力；而且需要昂貴的儀器設(shè)備，如PCR儀、酶標(biāo)儀和CO₂培養(yǎng)箱等，對非專業(yè)人員而言，上述檢測方法很難完成。雖然上述方法特異敏感，但每次只能檢測一種豬病，且無法實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測或診斷。本發(fā)明，研究一種簡便快速、實時在線，同時檢測三種豬病的三聯(lián)檢測試紙，對控制和消滅此類疾病意義重大。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測豬病病原存在的缺點，提供一種特異、敏感、簡便快速的呼吸道疾病檢測方法，研制出一次可同時檢測三種豬細(xì)菌性呼吸道疾病的三聯(lián)檢測試紙。