[發明專利]豬丹毒桿菌抗原快速檢測試紙條

有效

• 申請號: 201310083787.8
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103941002A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 張改平;李學伍;邢廣旭;鄧瑞廣;趙東;楊繼飛;柴書軍;王方雨
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

?一、技術領域

本發明是一種涉及豬丹毒桿菌抗原的檢測試劑顯示器具，特別是涉及一種可檢測豬丹毒桿菌抗原的檢測試紙條。

二、技術背景

豬丹毒是由豬丹毒桿菌引起豬的一種急性、熱性傳染病。不同年齡的豬均可感染，但主要侵害3～12月齡的架子豬，哺乳仔豬和產子母豬很少發生。人感染發病時稱為類丹毒。本病雖然一年四季均可發生，但在北方地區以夏季炎熱、多雨季節流行最盛，而在南方地區則在冬春季節流行。常為散發性或地方流行傳染，有時爆發流行。主要由污染的飼料、土壤經消化道感染，創傷皮膚也可感染。該病流行于世界各地，對養豬業危害很大。病豬、帶菌豬、及帶菌禽類是該病的主要傳染源，潛伏期3~5天，其發病特征為急性病例呈敗血型，開始發病時1~2頭豬無任何癥狀突然死亡，隨后出現較多的發病或死亡病豬，體溫升高42℃以上。食欲廢絕，行走搖擺，呼吸困難，粘膜發紺，發病幾天后，胸、腹、四肢內側及耳部皮膚出現大小不等的紅斑，指壓退色，病末期心臟衰弱、體溫下降、虛脫死亡。剖檢皮膚充血呈彌漫性紅色。脾臟充血、腫大、柔軟，呈暗紅褐色。腎臟黃褐色或暗紅色，充血腫大。肝淤血、棕紅色。胃粘膜、十二指腸、空腸粘膜腫脹，大腸無明顯變化。亞急性病例，在皮膚上發生大小不等、形狀不一的紫紅色疹塊，俗稱打火印。剖檢病死豬除有特征性的皮膚疹塊外，其脾、腎也表現敗血型變化。慢性大多由急性、亞急性轉變而來，主要表現關節炎和心內膜炎，剖檢關節腫大、關節腔內淡黃色液體增多，關節囊增厚，關節變形。心內膜炎型常見于二尖瓣形成顆粒狀增生物，外觀似菜花樣病變。常用檢測方法如下。

（1）顯微鏡檢查：將病料最好是肝、腎涂片（心內膜疣狀贅生物可表面觸片），自然干燥，用甲醇固定2～5分后，用美藍或復紅也可用姬姆薩氏或瑞特氏染色法及革蘭氏染色法染色后鏡檢。本菌在鏡下呈瘦長、正直或稍彎曲、纖細的桿菌。并呈散在、單個、成對或小堆狀或簇集于白細胞中。從心內膜贅生物制成的涂片，常可見有彎曲、長短不等、絲狀菌體，并呈亂發狀。本菌為革蘭氏陽性小桿菌；不產生芽胞；無鞭毛，不能運動。

????（2）細菌培養：①直接分離培養?對未被污染的新鮮病料可直接接種于血液瓊脂或血清瓊脂培養基，置37℃培養24～48小時后，觀察結果。在血清瓊脂上長出針尖大、透明、灰白色、圓形、微隆起的露珠狀小菌落。在血液瓊脂培養基上生長的菌落，周圍有綠色的狹窄溶血環。如被檢材料已經腐敗或被污染，可在上述培養基中加入抗生素（100微克／毫升新霉素或400微克／毫升卡那霉素或加入疊氮鈉和結晶紫各0.01％）抑制其它革蘭氏陰性菌生長。②增菌培養?如病料中病原菌少時，應先作增菌培養，即取病料一鉑耳，放入普通肉湯或血清肉湯（后者較好）中，培養24小時后觀察結果。

????豬丹毒在肉場中培養24小時后，肉湯呈均勻一致的輕微混濁，管底有少量沉淀，振蕩時沉淀物呈小絮片狀浮起，無菌膜及附著于管壁的環狀物；老齡培養時，多呈絮塊或絮條樣生長，并常懸浮于試管中央或沉于管底。

（3）動物試驗：當病料中含菌量極少，或已被污染，作細菌分離診斷有困難時，可接種小動物作為輔助診斷，動物試驗也是分離鑒定本菌的一個方面。其方法如下：將病料（疹塊部滲出液或血液、脾、肝、腎等）或純培養物接種于鴿子、小白鼠和豚鼠。先將病料磨碎，用滅菌生理鹽水作5～10倍稀釋制成懸液。鴿于胸肌接種0.5～l毫升，小白鼠皮下接種0.2毫升，豚鼠皮下或腹腔接種0.5～1毫升。若為肉湯培養物可直接接種。固體培養基上的菌落，需先用滅菌生理鹽水洗下，制成菌液再接種。接種后1～4日，鴿子翅、腿麻痹，精神萎頓，頭縮羽亂，不吃而死亡。小白鼠出現精神萎頓、背拱、毛亂、閉眼、不吃，3～7天死亡。死亡的鴿子和小白鼠可見脾臟腫大，肺和肝充血，肝有時可見小點壞死。取心血、腎、脾等，涂片鏡檢或分離培養，均可見有多量豬丹毒桿菌。豚鼠對豬丹毒桿菌有很強的抵抗力，接種后常不表現任何癥狀，仍健康存活。

（4）聚合酶鏈式反應(PCR)技術：PCR技術具有高靈敏度、高特異性等優點，PCR方法已被廣泛運用于豬丹毒桿菌的鑒定和流行病學調查。此外，還建立了檢測豬丹毒桿菌的ELISA方法。

上述檢測方法需要專業人員在實驗室操作，操作繁瑣，檢測費時費力；而且需要昂貴的儀器設備，如PCR儀、酶標儀等，對非專業人員而言，上述檢測方法很難完成。雖然上述方法特異敏感，但無法實現現場快速檢測或診斷。本發明，研究一種簡便快速、實時在線檢測試紙，對控制和消滅此疾病意義重大。

三、發明內容