[發(fā)明專利]一種基于Fe3O4@Au復(fù)合納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310083589.1
• 申請(qǐng)日: 2013-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN103196937A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張錦勝;唐群;賴衛(wèi)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N24/08
• 分類號(hào): G01N24/08;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 南昌洪達(dá)專利事務(wù)所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌快速檢測(cè)方法，?其特征步驟如下：

1）將檢測(cè)目標(biāo)菌與目標(biāo)菌的1抗結(jié)合形成1抗復(fù)合物；

2）檢測(cè)目標(biāo)菌的1抗抗體，即2抗特異性免疫磁珠的制備；

3）將目標(biāo)菌1抗特異性單克隆抗體在固相載體上的固定；

4）免疫磁珠富集目標(biāo)菌株，并分離：將第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步結(jié)合了1抗的待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標(biāo)菌后通過施加外加磁場(chǎng)，則磁珠就匯集到磁場(chǎng)一邊，吸走上清液則可以分離出磁珠，若待檢樣本中有目標(biāo)菌，目標(biāo)菌首先與1抗結(jié)合形成復(fù)合物，在加入2抗磁珠后，通過2抗與1抗的相互作用，從而捕獲1抗復(fù)合物，被磁珠所富集，加少量無菌的去離子水則形成目標(biāo)菌的磁珠懸濁液；

4）將富集的磁珠懸濁液加到第3步固定了1抗的單克隆抗體的固相載體上，若存在目標(biāo)菌則形成雙抗夾心，用無菌的去離子水清洗，則沒有抓取到目標(biāo)菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標(biāo)菌，則所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來，用外加磁場(chǎng)分離磁珠的方法，用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠就是抓到目標(biāo)菌的磁珠；

6）這部分磁珠，加入無菌的去離子水形成磁珠的懸濁液，進(jìn)行核磁共振的弛豫時(shí)間測(cè)定，在固定場(chǎng)強(qiáng)下，無菌的去離子水的T1/T2是一個(gè)恒定值，以無菌的去離子水為空白，測(cè)得的懸濁液的弛豫時(shí)間T1/T2相比無菌的去離子水有顯著降低，則說明含有磁珠，從而間接證明樣本中有目標(biāo)致病菌，磁珠的量與T1/T2的下降呈正比，可以通過加標(biāo)定量磁珠而間接定量出目標(biāo)菌的量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌快速檢測(cè)方法，其特征是所述NMR納米探針為Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子，即以金為殼層材料的磁性核殼復(fù)合納米粒子材料，納米粒徑小于1000納米。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌快速檢測(cè)方法，其特征是所述的目標(biāo)菌的最終檢出評(píng)價(jià)方法基于核磁共振技術(shù)的弛豫時(shí)間的變化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述NMR弛豫時(shí)間特性，是指自旋-晶格弛豫時(shí)間(T1)和自旋-自旋弛豫時(shí)間(T2)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述弛豫時(shí)間特性，T1采用180°-τ-90°脈沖方法測(cè)定，T2采用CPMG序列方法測(cè)定。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是目標(biāo)菌先與1抗結(jié)合形成復(fù)合物，用2抗特異性免疫磁珠富集、分離，1抗起信號(hào)放大作用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au復(fù)合納米粒子間接富集的食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是1抗指目標(biāo)菌單克隆抗體，2抗指第1抗體的抗體，可以是單克隆也可以是多克隆抗體。