[發(fā)明專利]一種基于Fe3O4@Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310083587.2
• 申請日: 2013-03-17
• 公開（公告）號: CN103149333A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張錦勝;唐群;賴衛(wèi)華
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: G01N33/02
• 分類號: G01N33/02
• 代理公司: 南昌洪達(dá)專利事務(wù)所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征步驟如下：

1）將檢測目標(biāo)菌與目標(biāo)菌的1抗結(jié)合形成1抗復(fù)合物；

2）檢測目標(biāo)菌的1抗抗體，即2抗特異性免疫磁珠的制備；

3）將目標(biāo)菌1抗特異性單克隆抗體在固相載體上的固定；

4）免疫磁珠富集目標(biāo)菌株，并分離：將第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步結(jié)合了1抗的待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標(biāo)菌后通過施加外加磁場，則磁珠就匯集到磁場一邊，吸走上清液則可以分離出磁珠，若待檢樣本中有目標(biāo)菌，目標(biāo)菌首先與1抗結(jié)合形成復(fù)合物，在加入2抗磁珠后，通過2抗與1抗的相互作用，從而捕獲1抗復(fù)合物，被磁珠所富集，加少量無菌的去離子水則形成目標(biāo)菌的磁珠懸濁液；

4）將富集的磁珠懸濁液加到第3步固定了1抗的單克隆抗體的固相載體上，若存在目標(biāo)菌則形成雙抗夾心，用無菌的去離子水清洗，則沒有抓取到目標(biāo)菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標(biāo)菌，則所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來，用外加磁場分離磁珠的方法用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠就是抓到目標(biāo)菌的磁珠；

6）這部分磁珠，加入分析純的硝酸和硫酸（王水）進(jìn)行硝化反應(yīng)，使磁珠Fe₃O₄轉(zhuǎn)變?yōu)槿齼r鐵離子和二價鐵離子，中和過量酸后采用鄰二氮菲吸光光度法或硫氰酸鉀比色法等可以檢測出鐵離子的量，從而可以算出磁珠的量，通過加標(biāo)定量磁珠而在一定程度間接定量出目標(biāo)菌的量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述納米探針為Fe₃O₄Au粒子，即以金為殼層粒子的磁性核殼復(fù)合納米粒子粒子，納米粒徑小于1000納米。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述的目標(biāo)菌的最終檢出評價方法是通過分析捕獲目標(biāo)菌的磁珠Fe₃O₄Au的量，間接計算目標(biāo)菌的量。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是通過硝化反應(yīng)，將捕獲目標(biāo)菌的磁珠轉(zhuǎn)化成鐵離子，通過檢測出鐵離子的量來定量磁珠量并間接定量目標(biāo)菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是目標(biāo)菌先與1抗結(jié)合形成復(fù)合物，用2抗特異性免疫磁珠富集、分離，1抗起信號放大作用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于Fe₃O₄Au納米粒子間接富集免疫磁分離的食源性致病菌快速檢測方法，其特征是1抗指目標(biāo)菌單克隆抗體，2抗指第1抗體的抗體，可以是單克隆也可以是多克隆抗體。