[發明專利]一種快速制備高密度高純藻種的方法

有效

• 申請號: 201310082447.3
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN104046566B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 李運廣;羅瑋;汪靚;伍陽;朱艷紅
• 申請（專利權）人: 李運廣
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速制備高密度高純藻種的方法，其特征在于：保種在固體培養基上的藻種依次轉移到滅菌的三角瓶、柱形透明玻璃培養管和平板光生物反應器中，搖動或通氣培養，通入氣體為CO₂和空氣的混合氣體，其中CO₂所占體積比為0.2-2％，體積比通過調節空氣和CO₂流速由流量計控制，CO₂氣體來自高壓鋼瓶或其它含高濃度CO₂的氣體，CO₂的比例以控制溶液pH在6.5-8.5為宜，低于此范圍，則降低濃度，高于此范圍則增加濃度；溫度控制20-30℃，24h供光，光強為5-100μmol photons m^-2s^-1,pH 7-12；所用高效液體培養基為在蒸餾水或經放置12h的自來水中添加以下營養鹽配制而成：KNO₃ 0.125-1.0gL^-1，NaNO₃ 0.125-1.0gL^-1，KH₂PO₄ 0.04-0.5gL^-1，Na₂HPO₄ 0.05-0.5gL^-1，MgSO₄·7H₂O 0.06-0.3gL^-1，CaCl₂ 0.02-0.1gL^-1，NaHCO₃ 0.02-3gL^-1,FeCl₂ 3-20mgL^-1，Na₂EDTA 1-10mgL^-1,H₃BO₃ 1-10mgL^-1，MnCl₂·4H₂O 0.5-5mgL^-1,ZnSO₄·7H₂O 0.1-0.6mgL^-1,CuSO₄·5H₂O 0.02-0.2mgL^-1,Na₂MoO₄·2H₂O 0.01-0.8mgL^-1，CoCl₂·6H₂O 0.02-4mgL^-1；配制時KNO₃、NaNO₃、KH₂PO₄和Na₂HPO₄依次溶解于蒸餾水中配成100X母液1，MgSO₄·7H₂O、CaCl₂和FeCl₂依次溶解于蒸餾水中配制成1000X的母液2，NaHCO₃配成1000X母液3，Na₂EDTA,H₃BO₃、MnCl₂·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O和CoCl₂·6H₂O依次溶解于蒸餾水中配制成1000X的母液4；配制培養基時取10ml母液1，1ml母液2、1ml母液3和1ml溶液4依次加入600ml水中，待充分攪拌后再加入另外一種，防止沉淀產生，最后補水至1L；

所述藻為單細胞綠藻或藍藻，或形成群體的綠藻或藍藻；對于形成較大群體的藻，用滅菌的勻漿器或研缽在不添加石英砂等輔助物的情況下輕輕研磨，以獲得單細胞或更小群體的接種物。

2.根據權利要求1所述的一種快速制備高密度高純藻種的方法，其特征在于：所述的三角瓶和玻璃管采用高溫高壓法滅菌，光生物反應器則在清洗晾干后，移入經過紫外線殺菌的培養室內，在內壁噴灑75％的酒精進行滅菌，待晾干后，封口備用。