[發明專利]人源化小鼠模型的構建方法和應用

在審

• 申請號: 201310082116.X
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN104046644A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 魏勤;徐平
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N5/10;C12Q1/02;A01K67/027
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列含有人Nbs1及其上下游長40－60kb的序列，其中，所述人Nbs1基因為人Nbs1^c.657del5基因。

2.如權利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列為BAC載體。

3.權利要求1或2所述的多核苷酸序列在制備構建Nbs1^c.657del5人源化轉基因小鼠及其后代用的物質中的用途。

4.一種細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、或組織提取物或細胞提取物，其特征在于，

所述細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、和組織提取物或細胞提取物來自經權利要求2所述的BAC載體轉基因的Nbs1^c.657del5人源化轉基因小鼠或其后代；和

所述細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、和組織提取物或細胞提取物的特征是人源Nbs1呈不同水平轉錄的、且BAC載體上同時存在的CALB1和DECR1基本不表達的、以及具有穩定的Nbs1^c.657del5轉基因。

5.如權利要求4所述的細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、或組織提取物或細胞提取物，其特征在于，所述Nbs1^c.657del5人源化轉基因小鼠或其后代具有以下一種或多種特征：

（1）人源Nbs1呈不同水平轉錄；

（2）BAC載體上同時存在的CALB1和DECR1基本不表達，或表達水平非常微弱，基本可忽略；

（3）具有穩定的Nbs1^c.657del5轉基因特征；

（4）人源Nbs1在胸腺、脾臟、睪丸、腦中高水平地轉錄，在肝臟、肌肉、心臟、腎臟、肺臟和結腸中被活躍地轉錄，其轉錄特征與內源Nbs1一致，參與到相關功能的信號通路中；

（5）NBS1^p70在所述小鼠或其后代的胚胎期、成年期的胸腺組織、脾臟組織和激活的B細胞中表達；其表達水平接近內源NBS1或高于內源NBS1的表達水平；

（6）具有發育遲緩、體長均勻縮短和骨發育異常（如上肢或下肢腳趾彎曲）的表型，與臨床上NBS病人的癥狀類似；和

（7）在至少12個月的生長期間內不發生自發腫瘤。

6.權利要求4或5所述的細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、或組織提取物或細胞提取物的用途，包括用于檢測化合物在如下實驗或疾病中的效果或用來研究可誘發下述疾病化合物的敏感性，

其中，所述實驗選自：藥物臨床前安全性評價；基因毒性和非基因毒性致癌物或抑癌物的廣泛性檢測；雙鏈斷裂修復失常與癌癥或其它相關疾病發生的關系研究；免疫毒理學實驗；

所述疾病選自：發育障礙，如頭小畸形、發育遲緩；面部特征異常，如前額退化、下頜骨退化、耳大、頭發稀疏；骨發育異常，如趾畸形、髖骨發育不良、骶骨發育不良；性發育障礙，如卵巢早熟性發育不足、雄性不育；易反復感染，如竇炎、肺炎；免疫缺陷，如體液免疫缺陷、細胞免疫缺陷；腦發育異常，如腦積水、大腦額葉發育不良；認知功能變差；皮膚異常，如淺褐色斑點、白癜風斑點。

7.權利要求4或5所述的細胞系或原代細胞培養物、組織或器官型切片培養物、組織外植體或器官外植體或其培養物、或組織提取物或細胞提取物的用途，包括用于評定環境致癌因子（如電離輻射、核輻射和紫外輻射等污染物）的強度是否達到了致癌水平、分析人和鼠源Nbs1功能的一致和差異性、確定作用于NBS1^p70的化合物的特異性、研究NBS1^p70或其他與NBS1^p70相關聯細胞成分的核內轉運和鑒定NBS1^p70的未知配體。