[發明專利]一種用于BACE1抑制劑篩選的電化學方法

無效

• 申請號: 201310081175.5
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN103217463A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 王建秀;劉峰;衣馨瑤;韓洪星;劉林
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 魏娟

1.一種用于BACE1抑制劑篩選的電化學方法，其特征在于，把生物素標記的多肽分子組裝在金電極的表面后，將金電極的表面封閉；用上述封閉了表面的金電極在待篩選的BACE1抑制劑和BACE1存在的條件下進行抑制酶切反應；再將巰基二茂鐵修飾的納米金/抗生物素蛋白復合物衍生到抑制酶切反應完成后得到的金電極的表面，并用衍生所得到的金電極通過電化學檢測進行BACE1抑制劑的篩選。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述BACE1抑制劑的篩選是將至少3根組裝了生物素標記的多肽分子并封閉了表面的金電極置于濃度為5～15nM的BACE1與不同濃度的待篩選的BACE1抑制劑的混合液中進行抑制酶切反應；在抑制酶切反應完成后所得到的金電極的表面衍生巰基二茂鐵修飾的納米金/抗生物素蛋白復合物，再進行電化學檢測；通過電化學響應確定抑制效果和抑制劑濃度的關系，并用IC₅₀值來判定待篩選的BACE1抑制劑的抑制效果，進行BACE1抑制劑的篩選。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的抑制酶切反應的反應條件是在37℃的環境中反應30～90min。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述巰基二茂鐵修飾的納米金/抗生物素蛋白復合物通過如下方法獲得：將HS-(CH₂)₆Fc超聲溶解在正己烷中,在上述溶液中加入PBS稀釋的納米金/抗生物素蛋白復合物，在800～1200rps的轉速下搖動20～28h，離心棄去有機相和水相，即得。

5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的封閉是將組裝了生物素標記的多肽分子的金電極先用0.1mM的HT浸泡4～10min，再用1%的BSA浸泡0.5～1.5h。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的生物素標記的多肽分子易溶于水。

7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的電化學檢測是將組裝好的金電極置于0.1～0.5M?KClO₄的水溶液中進行。