[發明專利]基于聚合酶鏈反應的大小金二聚體-銀核殼結構組裝產物手性研究的方法

有效

• 申請號: 201310080866.3
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103157792A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 胥傳來;趙媛;馬偉;徐麗廣;匡華;王利兵;劉麗強;宋珊珊;胡擁明;丁利
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: B22F1/02
• 分類號: B22F1/02;B22F9/24;B82Y40/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

一種基于聚合酶鏈反應的大小金二聚體-銀核殼結構組裝產物手性研究的方法，屬于材料化學領域。

背景技術

納米材料的自組裝是納米技術的一個研究熱點，原因在于自組裝納米材料能夠表現出不同于單分散的納米粒子的獨特的光學、電學、磁學和化學性質，通過研究自組裝材料的性質可以更好地理解宏觀材料的物理和化學性質。聚合酶鏈反應(Polymerase?Chain?Reaction)，是分子生物學中應用的基礎實驗手段，是上世紀80年代中期發展起來的一種體外特定核酸序列擴增技術。它具有特異性強、擴增效率高、快速、簡便、重復性好、易實現自動化等優點。納米技術與生物技術相結合產生的納米生物技術憑借其獨特的性質得到了廣泛的研究發展，被越來越多的科研人士所青睞。而金納米粒子，由于其獨特的物理、化學性質及生物相容性，在生物電化學、材料學及生物醫學等領域都有很廣泛的應用。將納米材料結合到PCR過程中已成為近年來的研究熱點，對于提高PCR的特異性和效率，和組裝結構手性性質的研究有很大的作用。本發明首先通過聚合酶鏈反應組裝大小金的二聚體，通過在大小金二聚體的表面進行一層銀生長，得到大小金二聚體-銀的核殼結構，并首先對該大小金二聚體-銀的核殼結構的手性性質進行了研究和探討。圓二色譜（CD）的原理是由不對稱分子組成的物質是光學各向異性的，物質對R和L兩種圓偏振光吸收程度不同的現象稱為圓二色性。這種吸收程度的不同與波長的關系稱圓二色譜，是一種測定分子不對稱結構的光譜法。可以用圓二色譜研究某些立體結構，對PCR組裝后不同銀殼厚度的大小金二聚體的手性進行研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于聚合酶鏈反應的大小金二聚體-銀核殼結構組裝產物手性研究的方法，并對具有不同銀殼厚度的大小金二聚體的手性性質進行研究。

本發明的技術方案：基于聚合酶鏈反應的大小金二聚體-銀核殼結構組裝產物手性研究的方法，包括基于聚合酶鏈反應的大小金二聚體的組裝，大小金二聚體表面進行不同厚度1nm-10nm的銀生長，大小金二聚體-銀核殼結構組裝產物的手性性質表征。

具體步驟：

（1）大小金二聚體的組裝

根據ZL?201110272661.6的權利要求1進行大小金二聚體組裝。具體為：

一種基于聚合酶鏈反應進行手性金二聚體的可控組裝方法，步驟包括金納米粒子的合成，金納米粒子和上下游引物的偶聯，金納米粒子和引物偶聯物的修飾，金二聚體的組裝及表征；

（ⅰ）金納米粒子的合成

采用檸檬酸三鈉還原氯金酸合成不同粒徑的金納米粒子；

（ⅱ）金納米粒子和上下游引物的偶聯

將合成出的金納米粒子和巰基修飾的上下游引物進行偶聯形成金納米粒子-引物偶聯物；

（ⅲ）金納米粒子-引物偶聯物的修飾

將金納米粒子-引物偶聯物和輔助DNA偶聯，得金納米粒子-引物-DNA復合體；

（ⅳ）金二聚體的組裝及其表征

在合適的PCR條件下，將金納米粒子-引物-DNA復合體在PCR體系中進行不同循環數下的組裝，離心濃縮，進行表征，得可控組裝的手性金二聚體；

模板：Plasmid?λDNA，

F-primer：5’-SH-ATGAAACGGCAGGCAGAACAGG-3’，

R-primer：5’-SH-ACAGGGACATCGCCACCAGAAA-3’，

輔助DNA：5’-AAAAAAAAAAAA-3’；

所述（ⅰ）不同粒徑金納米粒子的合成：

合成方案：潔凈的三角燒瓶中加入95mL的水，而后向水中加入5mL的濃度為2g/L的氯金酸，加熱，煮沸，緊接著加入2.5mL質量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液，邊加熱邊攪拌，溶液顏色從淡黃色變成紅色，反應持續6-8min以使檸檬酸三鈉完全沉降；最后，冷卻溶液至室溫，稀釋到100mL，4℃保藏，即制得粒徑18nm的金納米粒子；調整檸檬酸的用量得到不同粒徑的金納米粒子，質量濃度1%的檸檬酸的用量減少至1.4mL得到粒徑25nm的金納米粒子，1%的檸檬酸的用量增加至5.0mL得到粒徑10nm的金納米粒子；

所述（ⅱ）金納米粒子和上下游引物的偶聯：

（a）將步驟（ⅰ）中制備的1mL的金納米粒子10000r/min離心10min，用1mL的水分散，10000r/min離心10min，棄上清，用100μL含0.01%的SDS的pH8.0、0.01M的PBS分散，4℃保藏、待用；