[發(fā)明專利]一種煙草抗旱種質的快速、高通量篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310080805.7
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN103109687A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設計）人: 李廷春;周應兵;楊華應
• 申請（專利權）人: 安徽省農業(yè)科學院煙草研究所
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00;A01C1/00;A01C1/02
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

技術領域

本發(fā)明涉及煙草種質篩選方法，具體是一種煙草抗旱種質的快速、高通量篩選方法。

背景技術

干旱是影響植物生長發(fā)育的主要環(huán)境因子之一。煙草在生長過程中，特別是從團棵期進入旺長期時常常遭遇干旱，干旱已經成為影響其營養(yǎng)生長的重要因素。因此，通過對煙草抗旱材料的篩選、利用，可望研究植物的抗旱機制，選育抗旱的煙草品種，以解決生產中的干旱問題。

目前，前人在抗旱研究中得出了一些行之有效的抗旱篩選方法，這些方法有田間直接鑒定、旱棚鑒定、盆栽鑒定、室內模擬干旱發(fā)芽期鑒定等等，由于田間直接鑒定、旱棚鑒定與盆栽鑒定受自然條件、作物自身發(fā)育特性影響較大，試驗誤差較大；相比而言，由于室內模擬干旱具有條件可控性強、試驗周期短、方法簡單、適用于大批量篩選、鑒定，所以，室內模擬干旱的方法是較為常用的方法，但由于處理方法、測試時間和評價標準不同，試驗的結論也存在較大的誤差。?

發(fā)明內容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術存在的不足之處，提供一種煙草抗旱種質的快速、高通量篩選方法，該方法通過在種子發(fā)芽后的小苗期，采用高濃度、高分子量的聚乙二醇（PEG）滲透溶液模擬小苗生長的干旱脅迫條件，研究在高滲透溶液下煙草種子的根生長量和萎焉植株率，以減小誤差，提高篩選方法的準確性。

本發(fā)明實現(xiàn)發(fā)明目的采用如下技術方案：

一種煙草抗旱種質的快速、高通量篩選方法，其特點在于按如下步驟進行：

（1）煙草種子的消毒處理

精選大小一致、無破損的種子，用體積濃度8-12%H₂O₂處理10min，再用蒸餾水洗3-4次后，晾干，待用；

（2）煙草種子發(fā)芽試驗

培養(yǎng)皿中以雙層濾紙為發(fā)芽床，然后放入步驟（1）消毒處理過的種子放入培養(yǎng)皿中，用蒸餾水進行發(fā)芽，蓋好培養(yǎng)皿后，放入晝溫度為28℃、10h，夜溫度為25℃、14h的氣候培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；

（3）定苗、控水

連續(xù)培養(yǎng)7-10天后，取出，進行定苗，剔除未發(fā)芽種子、弱苗，留長勢較好的小苗，傾斜放置培養(yǎng)皿，控水至濾紙吸水至飽和，用移液器吸出多余水份；

（4）PEG-6000處理

加入等同濾紙吸收飽和所需蒸餾水量的50%PEG-6000，至皿中PEG-6000終質量濃度為25%，然后蓋好培養(yǎng)皿，用石蠟膜封口，放入晝溫度為28℃、10h，夜溫度為25℃、14h的氣候培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；以蒸餾水處理為對照；

（5）煙草萎焉比率和根長變化量的測定

步驟(3)長勢較好的小苗經步驟（4）的氣候培養(yǎng)箱培連續(xù)培養(yǎng)5天后，取出，記錄煙草小苗萎焉植株數(shù)，測定小苗的根長，計算小苗萎焉植株數(shù)和根長生長變化量。

計算公式①、②

①?萎焉率（%）=（萎焉小苗植株數(shù)/小苗總數(shù)）×100%

②?根長伸長比（%）=（PEG處理后小苗根長-PEG處理前小苗根長）/（PEG處理前小苗根長）×100%

其中，對不同的材料，萎焉率越小、根長變化比越大，表明材料的抗旱性越好。

與已有技術相比，本發(fā)明有益效果體現(xiàn)在：

本發(fā)明通過對種子發(fā)芽后的萎焉率和根長伸長比比較來篩選抗旱煙草材料，其操作簡單，快速，誤差小，準確性好，能有效、快速的進行煙草抗旱材料的大批量篩選。

附圖說明

圖1是本發(fā)明篩選方法中采用PEG-6000處理條件下的不同品種（系）小苗萎焉率比較。

圖2是本發(fā)明篩選方法中采用PEG-6000處理條件下的不同煙草品種根長伸長比比較。

圖3是傳統(tǒng)篩選方法中采用?PEG-6000處理條件下的不同品種發(fā)芽率比較。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發(fā)明做進一步詳細的說明：

實施例1

本發(fā)明具體實施方式采用的材料及儀器：

儀器：人工氣候培養(yǎng)箱、移液器、培養(yǎng)皿、直尺

材料：PEG-6000、蒸餾水、濾紙、石蠟膜

如下實施例材料：歪把子、云煙87、安選一號、云煙97、K326、長脖黃、NC89、中煙100、吉煙9號、6517、NC82、Coker411、春雷三號、中煙14；均由安徽省農業(yè)科學院煙草研究所提供。

實施例：

（1）煙草種子的消毒處理：