[發明專利]一株產果膠酶菌株及其在制備柑桔脫囊衣復合酶中的應用

有效

• 申請號: 201310080723.2
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103173366A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 魏春;汪釗;吳鵬飛;鄢洪德;章銀軍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/18;C12N9/26;C12N9/88;C12N9/00;C12N9/42;C12R1/685
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

（一）技術領域

本發明涉及一株產果膠酶菌株——黑曲霉(Asperillus?niger）WZW001，及其在制備果膠酶和柑桔脫囊衣復合酶中的應用。?

（二）背景技術

我國柑桔種植面積和產量位居世界首位，年產量已達2000×10⁴t以上，我國也是世界柑桔罐頭的中心產地，柑桔約75%以上在11～12月份成熟，加工期僅為2～3個月，柑桔深加工可有效解決柑桔季節性強的問題，促進我國柑桔深加工業的發展，帶來巨大的經濟和社會效益。脫囊衣工藝是生產柑桔罐頭和囊胞的關鍵工序，目前國內外工業化脫囊衣方法普遍采用流槽式酸堿處理法，此法耗水量大、環境污染嚴重，產品質量難以保證，容易致使我國柑桔罐頭及囊胞的出口貿易面臨技術和綠色壁壘。而酶法脫囊衣工藝處理條件溫和、產品質量穩定、安全可靠可替代酸堿化學法，但是普通的食品級果膠酶及纖維素酶價格都在幾百元/kg，導致酶法脫囊衣的成本較高。?

柑桔囊衣的主要組分是果膠，少量的纖維素及半纖維素。柑桔脫囊衣工藝中果膠酶發揮主要作用，果膠酶主要包括聚半乳糖醛酸酶(Exo-PG)、果膠酯酶（PE）和果膠裂解酶（PL），目前食品級果膠酶一般為黑曲霉發酵生產，一般情況下果膠酶中還含有少量的纖維素酶和半纖維素酶。不同菌株、不同的發酵條件生產的果膠酶中Exo-PG、PE、PL等組分含量及比例不同，纖維素酶及半纖維素酶含量也不同，致使不同的果膠酶應用領?域和效果不一樣，在柑桔脫囊衣的應用也會有不同的效果。?

公開號為CN101095554A，專利名稱為“柑桔全果酶法脫囊衣的方法”中，單楊，李高陽等人將果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶復配應用于柑桔全果酶法脫囊衣工藝中，但此復合酶沒有說明果膠酶中哪種酶起主要作用及各種酶之間的相互協同作用，且需要三種食品級商品酶復配。公開號為CN102078024A，專利名稱為“用于桔瓣脫囊衣的液體復合酶及其復配工藝和應用”中，楊曉英、苑偉偉等人將果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶及　-葡聚糖酶復配應用于柑桔脫囊衣工藝，取得了不錯效果，但是需四種食品級商品酶復配同樣導致酶的成本較高。?

現有技術都沒有深入研究脫囊衣用酶酶系各組分與其脫囊衣效率的關系，未開發出柑桔脫囊衣專用酶，且現有的脫囊衣用酶一般需要3～5中食品級商品酶復配，不僅導致酶的使用成本較高，而且復合酶活力不穩定，不利于工業化應用。?

（三）發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明目的是提供一種成本低、效率高、應用穩定、產品安全特別適合于椪柑類、溫州蜜柑等寬皮桔類的柑桔脫囊衣復合酶及其獲得方法，以解決柑桔酶法脫囊衣工藝成本較高的問題。?

本發明采用的技術方案是：?

一株果膠酶高產菌——黑曲霉(Asperillus?niger)WZW001，于2012年10月12日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，郵編430072，保藏編號為CCTCC?No：M2012399。?

本發明所述的菌株按照本領域普遍的方法篩選得到，菌株為黑曲霉?WZW001，保藏號為CCTCC?M2012399，該菌株的生物學特性為:菌落在PDA培養基上生長迅速，30℃培養3天直徑為45～60毫米；質地絲絨狀或稍帶絮狀；分生孢子結構大量，褐黑色，無滲出液；菌落反面略帶黃色。菌株培養學特性為:分生孢子頭球形，直徑30～60微米；分生孢子梗發于基質，分生孢子梗莖（100～400）微米×（4～8）微米，壁平滑；頂囊球形或近球形，直徑10～15微米，全部表面可育；產孢結構雙層，梗基（1～2）微米×（0.4～0.7）微米，瓶梗（0.5～0.8）微米×（0.2×0.3）微米，分生孢子球形或近球形，1.5～2微米，壁粗糙。?

本發明還涉及所述的黑曲霉WZW001在制備果膠酶中的應用。本發明菌株經發酵，可獲得果膠酶，該果膠酶可進一步用于制備柑桔脫囊衣復合酶。?

本發明還涉及所述的黑曲霉WZW001在制備柑桔脫囊衣復合酶中的應用。?

具體的，所述應用如下：黑曲霉WZW001接種至常規適用于黑曲霉的含桔皮粉的液體發酵培養基，30～35℃培養72～96小時，發酵液經過濾、膜濃縮后添加適量可溶性淀粉進行噴霧干燥制得固體果膠酶；或者發酵液經鹽析或有機溶劑沉淀、膜分離、離子交換層析分別得到外切-聚半乳糖醛酸酶（Exo-PG）、果膠酯酶（PE）和果膠裂解酶（PL）單一酶組分；將所得固體果膠酶，或者單一酶組分中的一種或多種與纖維素酶進行復配，即得所述柑桔脫囊衣復合酶。?