[發明專利]一種共分離制備雞蛋清溶菌酶與活性蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310080459.2
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN103160482A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 聞崇煒;寧德剛;徐衛東
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36;C07K14/77;C07K14/79;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

?

技術領域

本發明涉及生物、醫藥及食品工業技術領域，更具體涉及一種從雞蛋清中共分離制備溶菌酶和其它活性蛋白的方法。

背景技術

雞蛋清中含有溶菌酶、卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類粘蛋白、卵粘蛋白和其它多種球蛋白。其中，溶菌酶?(Lysozyme)?可以選擇性水解細菌細胞壁的N-乙酰葡萄糖胺與N-乙酰胞壁酸之間的β-1，4糖苷鍵，是一種安全高效的天然抗菌劑，可用于海產品、水產品、肉制品、乳酪制品、低度酒、糕點等多種食品的防腐保鮮，用于基因工程中提取細菌體內的活性物質，用于制備口腔藥片或漱口液，用于治療副鼻竇炎、口腔潰瘍和滲出性中耳炎等疾病。卵白蛋白可用于制備酶解卵白蛋白，發揮抑制細胞病變，增強人體免疫力，清除對人體有害的自由基，改善新陳代謝的作用。卵轉鐵蛋白具有抗菌與抗病毒活性，在提高機體的免疫功能，增強機體抗病防病能力，防治貧血方面具有廣闊的應用前景。

當前所用的溶菌酶制備方法有直接結晶法、親和色譜法、超濾法、反膠團萃取法與離子交換法等。這些方法有的雖然操作簡單，成本較低，但是生產周期長，收率不高，純度較低；有的成本較高，操作難度較大，限制了在工業上的大規模應用。同時上述方法都不利于共分離制備雞蛋清中的卵白蛋白、卵轉鐵蛋白等其它活性蛋白。

我國目前已經成為世界上鮮蛋生產第一大國，但鮮蛋基本作為初級食品食用，深加工程度明顯落后于發達國家40%以上的鮮蛋加工率。如何更加有效地從雞蛋清中分離獲取溶菌酶及卵白蛋白、卵轉鐵蛋白等其它活性蛋白是當今深受關注的課題。

發明內容

本發明的目的是提供一種共分離制備雞蛋清溶菌酶和其它活性蛋白的方法。該方法所用工藝簡單快捷，條件溫和，無需復雜設備，可以獲得高純度與高生物活性的溶菌酶，可以克服現有溶菌酶制備工藝的缺點。本發明在實施制備溶菌酶的同時還可以獲得較高純度的其它活性蛋白。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術措施：?

1）室溫下取新鮮雞蛋，收集雞蛋清，按照雞蛋清與新鮮去離子水體積比為1：2的比例進行稀釋，隨后用1M鹽酸調至pH?5.5左右，均勻攪拌1小時，8000rpm離心去除沉淀，收集上清液A。

2）向所得上清液A中加入分子量介于200-20000的聚乙二醇，至聚乙二醇的質量濃度達10-30%，再攪拌1小時，8000rpm離心，收集上清液B。

3）向所得上清液B中加入飽和硫酸銨溶液，至硫酸銨的質量濃度達到15%，混勻后于6000rpm離心，分別收集上層清液C與下層清液D。

4）對所得上層清液C，以膜截留分子量為3000-5000Da的超濾膜進行超濾，或者進行透析處理，對超濾或者透析處理所得溶液進行真空冷凍干燥，得到白色粉末，即為溶菌酶。

5）對所得下層清液D，以膜截留分子量為3000-5000Da的超濾膜進行超濾，或者進行透析處理，對超濾或者透析處理所得溶液進行真空冷凍干燥，得到白色粉末，即為卵白蛋白與卵轉鐵蛋白為主的較高純度的其它活性蛋白。

本發明具有以下優點：

1?本發明涉及的提取原料雞蛋清來源廣泛，價格低廉；

2?本發明所用工藝操作簡單易行，生產周期短，無需復雜設備，易于大規模工業化生產；

3?本發明所用工藝未使用任何有毒有害化學物質，確保產品質量的安全性；

4?本發明所用分離步驟中無相變發生，有利于保護溶菌酶與其它蛋白的生物學活性；

5?本發明從雞蛋清中提取溶菌酶的同時還可以獲取卵白蛋白與卵轉鐵蛋白為主的較高純度的其它活性蛋白，顯著提高生產工藝的經濟效益。

附圖說明

圖1為一種共分離制備雞蛋清溶菌酶和其它活性蛋白的方法的工藝流程示意圖。

圖2為十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測聚乙二醇200處理蛋清所得結果。其中，泳道1：蛋白分子量標準；泳道2：所用雞蛋清原料；泳道3：質量濃度為10%的聚乙二醇200處理后雞蛋清；泳道4：質量濃度為15%的硫酸銨處理后所得上相溶液；泳道5：質量濃度為15%的硫酸銨處理后所得下相溶液。

圖3為十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測聚乙二醇200處理蛋清所得結果。其中，泳道1：蛋白分子量標準；泳道2：所用雞蛋清原料；泳道3：質量濃度為30%的聚乙二醇200處理后雞蛋清；泳道4：質量濃度為15%的硫酸銨處理后所得上相溶液；泳道5：質量濃度為15%的硫酸銨處理后所得下相溶液。