[發明專利]一種脂連素的檢測標的物及制備方法

無效

• 申請號: 201310080139.7
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN104049086A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 成天宏
• 申請（專利權）人: 無錫凱瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標事務所(普通合伙) 32227
• 代理人: 顧吉云

技術領域

本發明涉及體液標志蛋白檢測試劑技術領域，尤其涉及脂連素檢測試劑，具體為一種脂連素的檢測標的物及制備方法。

背景技術

在臨床上，體液標志蛋白的檢測方法主要采用免疫學方法，以酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked?Immunosorbent?Assay，ELISA）、放射免疫測定（Radio?immunoassay，RIA）、免疫比濁法和膠體金比色法這幾種方法為主。ELISA方法定結果的準確性高，標本處理數量適中，但操作繁瑣且時間長，難以進行質量控制，自動化程度低，不適宜大范圍推廣使用；RIA方法設計放射性的原因難以推廣；膠體金比色法其膠體金生產工藝復雜、成本高，也難以大范圍推廣使用；免疫比濁法穩定性好、生產工藝簡單，但其靈敏度低，抗體使用量大，新型檢測標的物生產成本高。

發明內容

針對上述問題，本發明提供了一種脂連素的檢測標的物及制備方法，其標的物靈敏度高，使用量小，并且其制備工藝簡單，生產成本低，其標的物的使用能提高免疫比濁法檢測精度，進而使免疫比濁法能夠大范圍推廣使用。

其技術方案是這樣的，一種脂連素的檢測標的物，其特征在于：所述標的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復合物，所述復合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構成，所述復合物的脂連素抗原結合位點暴露。

本發明還提供了一種制備上述脂連素的檢測標的物的方法，其特征在于：其包括以下步驟：

A、聚苯乙烯乳液的制備：將聚苯乙烯乳膠顆粒溶解于甘氨酸氯化鈉緩沖液中；

B、標的物的制備：將脂連素抗體加入聚苯乙烯乳液中，并置于4℃水浴搖動；

C、將牛血清白蛋白加入步驟B形成的溶液中；

D、離心：對步驟C所得溶液進行離心操作，收集沉淀；

E、洗滌：對步驟D收集的沉淀進行洗滌；

F、超聲：將經步驟E洗滌的沉淀加入緩沖液，超聲處理；

G、儲存：步驟F所得溶液2-8℃儲存。

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其進一步特征在于：

所述甘氨酸氯化鈉緩沖液：甘氨酸濃度為100?mmol/l，氯化鈉濃度為100?mmol/l，溶劑為水；

所述搖動條件為：75轉/分鐘，時間為1小時；

步驟F中所述緩沖液組成為：?100?mmol/l甘氨酸，100?mmol/l氯化鈉，0.075?%疊氮化鈉，溶劑為水；

所述超聲條件為：45kHz，20秒。

采用本發明后，其有益效果在于：新的標的物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構成，脂連素抗體結合聚苯乙烯乳膠顆粒后，脂連素抗體構象改變，暴露其抗原結合位點，提高與抗原的特異性結合能力，從而提高標的物的靈敏度，降低抗體使用量；由于新標的物的組成為脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒，原材料成本低，并且新標的物制備工藝簡單，生產成本低，進而使免疫比濁法在提高檢測精度的同時能夠大范圍推廣使用。

附圖說明

圖1為本發明脂連素檢測標的物制備方法步驟A的反應過程示意圖；

圖2為本發明脂連素檢測標的物制備方法步驟B的反應過程示意圖。

具體實施方式

一種制備脂連素的檢測標的物的方法，其包括以下步驟：

A、聚苯乙烯乳液的制備：將聚苯乙烯乳膠顆粒溶解于甘氨酸氯化鈉緩沖液中；

B、標的物的制備：將脂連素抗體加入聚苯乙烯乳液中，并置于4℃水浴搖動；

C、將牛血清白蛋白加入步驟B形成的溶液中；

D、離心：對步驟C所得溶液進行離心操作，收集沉淀；

E、洗滌：對步驟D收集的沉淀進行洗滌；

F、超聲：將經步驟E洗滌的沉淀加入緩沖液，超聲處理；

G、儲存：步驟F所得溶液2-8℃儲存。

甘氨酸氯化鈉緩沖液：甘氨酸濃度為100?mmol/l，氯化鈉濃度為100?mmol/l，溶劑為水；

搖動條件為：75轉/分鐘，時間為1小時；

步驟F中緩沖液組成為：?100?mmol/l甘氨酸，100?mmol/l氯化鈉，0.075?%疊氮化鈉，溶劑為水；

超聲條件為：45kHz，20秒。

???????通過上述方法制備的脂連素的檢測標的物，標的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復合物，復合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構成，復合物的脂連素抗原結合位點暴露。

步驟B中，脂連素抗體與聚苯乙烯乳膠顆粒通過分子間作用力結合形成乳膠脂連素抗體復合物；步驟C中牛血清白蛋白與未結合脂連素抗體的聚苯乙烯乳膠顆粒結合。