[發明專利]裸花紫珠無菌播種與快速組培繁殖方法

無效

• 申請號: 201310079154.X
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103125393A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 潘梅;姜殿強;云勇;黃賽;王景飛;呂德任;戚華莎
• 申請（專利權）人: 海南省農業科學院園林花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: ?？谙柘鑼＠聞沼邢薰?46001
• 代理人: 劉清蓮

技術領域

本發明涉及一種裸花紫珠無菌播種與快速組培繁殖方法。

背景技術

裸花紫珠(Callicarpa?nudiflora?Hook.ex?Am)為馬鞭草科紫珠屬多年生小灌木植物，主產于中國海南，廣東、廣西也有分布，國外主要分布在越南、馬來西亞和印度。裸花紫珠是一種珍貴的藥材，始載于唐《本草拾遺》，其根、莖、葉均可入藥，有消炎、收斂、止血、清熱解毒等功效。裸花紫珠用途廣泛，其藥用歷史悠長，作用廣且療效顯著，目前醫用臨床上有裸花紫珠膠囊、裸花紫珠片、裸花紫珠栓等成品藥劑，此外，裸花紫珠還用于制作牙膏，其葉可直接泡水飲用。由于裸花紫珠種子出苗率低，扦插繁殖系數較小，基本上沒有大面積種植，其生產原材料主要依靠采挖野生資源，隨著市場需求量的逐年增加，野生資源的逐年銳減，已遠遠不能滿足生產的需求。而且由于人為無度的大肆采收，資源破壞嚴重。因此，進行裸花紫珠的人工繁殖極有必要，而采用組織培養技術是最為有效的人工繁殖途經。目前，有關裸花紫珠的研究主要集中在化學成分、藥理作用及臨床應用上，利用種子和枝條進行人工繁育的報道極少，而裸花紫珠的組織培養和快速繁殖尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供了裸花紫珠無菌播種與快速組培繁殖方法，該方法操作簡單、繁殖率高，可快速大量生產性狀一致的裸花紫珠組培苗，解決了播種出苗率低，扦插繁殖系數小而致繁殖速度過慢問題。

　為了實現上述目的，本發明的技術方案為：提供裸花紫珠無菌播種與快速組培繁殖方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）材料與外植體消毒：選用裸花紫珠成熟種子，將裸花紫珠種子在自來水中清洗干凈后用紗布包裹，在超凈工作臺上，先用濃度為75%酒精浸泡10?s，無菌水沖洗3次，再用濃度為0.1%?HgCl₂溶液浸泡10?min，再用無菌水沖洗5次；

（2）種子誘導培養基的制備：以MS為基本培養基,添加蔗糖30?g/L、卡拉膠6?g/L，pH?5.8，配制后,于溫度121℃、壓力0.14?MPa高溫高壓滅菌20?min；

（3）種子的萌發：將已消毒好的種子接入步驟（2）種子誘導培養基中，培養25天后開始萌發，培養溫度為24～28℃，光照強度1500?lx，光照時間8?h/d；

（4）叢生芽的誘導：切取小苗上端約1.0?cm長轉入增殖培養基中，28～30天可分化出5～6個芽，萌發出的新芽即可用解剖刀切分轉入相同的培養基中進行增殖培養;增殖培養基為MS+?6-BA?2.00?mg/L+?NAA?0.05?mg/L+蔗糖30?g/L+卡拉膠6.0?g/L，pH?5.8；

（5）叢生芽繼代增殖:叢生芽接入培養基MS+?6-BA?2.00?mg/L+?NAA?0.05?mg/L?+蔗糖30?g/L+卡拉膠6.0?g/L，pH?5.8，置于溫度為24～28℃，光照強度為1500?lx的培養室中培養，光照時間8?h/d，繼代時間為30～40?d；

（6）生根培養：將高度達到2?cm的小苗進行生根培養，培養基為MS+NAA?0.5～0.75?mg/L+蔗糖30?g/L+卡拉膠6.0?g/L，pH?5.8，培養溫度為24～28℃，光照強度1500?lx，光照時間8?h/d；

（7）組培苗的煉苗與移栽：無根苗在生根培養基中培養30天后，苗高3～5?cm，根5條以上，將其移入拱棚內煉苗7～15天即可移栽;小苗從培養袋中取出后，用清水洗去根部殘留的培養基，栽植于下列體積比為1:1:1混合基質中：河沙、珍珠巖和表土，種后澆透水，蓋上透明塑料薄膜，注意遮陰，?20天揭去覆蓋的透明薄膜，常規管理。

本發明提供了裸花紫珠高效快速組織培養的方法。該方法選取裸花紫珠的成熟種子，經初代培養形成不定芽，利用不定芽進行繼代增殖及生根培養。采用此組織培養方法繁殖裸花紫珠，操作簡單，繁殖率高，可快速大量生產性狀一致的裸花紫珠組培苗，解決了播種出苗率低，扦插繁殖系數小而致繁殖速度過慢的問題。該技術可用于工廠化生產，將對裸花紫珠的保護、開發和利用提供有效的新途徑，具有重要的經濟、社會和生態效益。

具體實施方式

1?材料與方法

1.1??材料與外植體消毒

材料為采自海南五指山的裸花紫珠成熟種子。將裸花紫珠種子在自來水中清洗干凈后用紗布包裹，在超凈工作臺上，先用75%酒精浸泡10?s，無菌水沖洗3次，再用0.1%?HgCl₂溶液浸泡10?min，無菌水沖洗5次，然后將種子接種到誘導培養基上。

1.2??培養基