[發明專利]氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應用

有效

• 申請號: 201310079071.0
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103146634A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 馬平;李社增;鹿秀云;郭慶港;張曉云
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;A01N63/02;C12R1/125
• 代理公司: 北京修典盛世知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11424
• 代理人: 胡長遠

技術領域

本發明屬于微生物農藥領域，具體涉及氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應用；以及利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法；此外還涉及一種芽孢耐熱性強的枯草芽孢桿菌菌劑及其制備方法。

背景技術

枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）是土壤中一類比較重要的生防微生物群體，能夠防治多種植物病害（何禮遠.生物防治通報,1985,1(3)：28-31；Yu?G?Y等，Soil?Biology?and?Biochemistry.2002,34:955-963）。芽孢是芽孢桿菌在發酵后期產生的一類抗逆性較強的休眠體（沈萍等，微生物學，高等教育出版社.2006,55-60），常被作為有效成分制作成微生物農藥，但是相對于化學農藥，以芽孢為有效成分的微生物農藥貨架期相對較短，而芽孢的耐熱能力是影響其貨架期的主要因素之一。

芽孢的耐熱性能除了受相關基因的控制外，外界環境中金屬離子、溫度、酸堿度等均能影響芽孢的形成與性能，其中金屬離子Ca²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺對芽孢的耐熱性能有不同程度的提高效果（Granger?A?C等.Applied?and?Environmental?Microbiology.2011,77(1):32-40）。因此，提高枯草芽孢桿菌芽孢的耐熱性是延長相應的微生物農藥貨架期的有效途徑之一。

發明內容

針對枯草芽孢桿菌微生物農藥貨架期短的問題，本發明目的在于提供氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應用。

本發明另一目的在于提供利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法。

本發明第三目的在于提供一種芽孢耐熱性強的枯草芽孢桿菌菌劑。

本發明第四目的在于提供上述芽孢耐熱性強的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法。

本發明的目的通過以下的技術方案實現：

氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應用。

本發明利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，包括向枯草芽孢桿菌發酵培養前的發酵培養基或者發酵培養結束后的發酵液中添加MgCl₂，攪拌均勻。

上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，按照每100mL發酵培養基中添加0.1g～0.3g?MgCl₂的比例向發酵培養基中添加MgCl₂；其中所述的發酵培養基的組成成分及質量百分比為：葡萄糖2%～2.5%，可溶性淀粉3%～5%，蛋白胨0.1%～0.2%，NaNO₃1%～2%，K₂HPO₄0.2%～0.4%，MgSO₄·7H₂O0.1%～0.2%，CaCO₃0.05%～0.15%，其余為水。

上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，按照每100mL發酵液中添加0.1g～0.3g?MgCl₂的比例向發酵液中添加MgCl₂；其中所述的發酵液中枯草芽孢桿菌的總菌數為1.0×10⁹～1.0×10¹⁰個/mL，其中芽孢約占枯草芽孢桿菌總菌數的90％。

所述的枯草芽孢桿菌是指以芽孢作為微生物農藥有效成分的枯草芽孢桿菌；如BAB-1（2007年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.2099）。

上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中，其所述的發酵液按照如下方法制備：

（1）菌種活化

將低溫保存的枯草芽孢桿菌菌種在LB培養基固體平板上劃線，然后在28℃～32℃下培養20～24小時，得活化菌種；

（2）種子液制備

按照將一接種環活化菌種接種于100mL種子液培養基的比例將活化菌種接種于種子液培養基中，在30℃～32℃、170～210r/min條件下振蕩培養10～15h，得種子液；

（3）發酵液制備

按照體積百分比為3%～5%的比例將步驟（2）所得的種子液接種到發酵培養基中，在30℃～32℃、pH7.0～7.5、170～210r/min條件下振蕩培養40～50h，得發酵液。

上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中所述的LB培養基、種子液培養基、發酵培養基按照常規方法制備。