[發(fā)明專利]一種萊克多巴胺人工抗原及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310078328.0
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號(hào): CN103145566A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈建忠;王戰(zhàn)輝;史為民;張素霞;梁琦;江海洋;曹興元;丁雙陽;李建成
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C215/60
• 分類號(hào): C07C215/60;C07C213/08;C07D209/48;C07K14/765;C07K16/44;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種萊克多巴胺人工抗原及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

萊克多巴胺是一種醫(yī)藥原料，具有廣泛的生理效應(yīng)，可用治療充血性心力衰竭癥的強(qiáng)心藥，且常用于支氣管哮喘、支氣管痙攣和產(chǎn)科疾病的治療。當(dāng)其用量增加到臨床用量的5-10倍時(shí)，可增加肌肉生長，減少脂肪蓄積，是良好的營養(yǎng)分配劑和生長促進(jìn)劑。美國FDA在2000年批準(zhǔn)，可以用于動(dòng)物營養(yǎng)重新配劑，廣泛地用于畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)。可以同時(shí)提高動(dòng)物的日增重，提高飼料利用率，提高動(dòng)物的蛋白質(zhì)含量。但是其在動(dòng)物體內(nèi)的殘留一旦經(jīng)食物鏈進(jìn)入人體，會(huì)對食用者產(chǎn)生巨大危害，特別對心臟病、糖尿病、高血壓、甲亢、青光眼、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精（萊克多巴胺是“瘦肉精藥物”中的一種）在上海曾經(jīng)引發(fā)幾百人的中毒事件；在臺(tái)灣由于從美國進(jìn)口的豬肉里含有瘦肉精，幾乎挑起一場政治爭端。目前我國禁止將β-激動(dòng)劑等藥物動(dòng)物促生長劑使用。但長期以來，各種因非法使用β-激動(dòng)劑而造成的中毒事件時(shí)有發(fā)生。為打擊非法用藥，保護(hù)消費(fèi)者的健康與安全，迫切需要健全相關(guān)的檢測方法。

目前，獸藥殘留檢測常用的方法有氣相色譜、高效液相色譜以及氣質(zhì)聯(lián)用等理化分析方法。雖然這些方法特異性強(qiáng)、靈敏度高，但是樣品前處理操作步驟繁瑣，成本較高，也不適用于大批量樣品的篩選檢測。免疫化學(xué)分析鑒于在抗原抗體的定性定量方面獨(dú)特的優(yōu)勢和操作簡便快速、成本低、靈敏度較高、分析樣本量大的優(yōu)點(diǎn)彌補(bǔ)了理化分析的不足，在萊克多巴胺的殘留檢測中起著越來越重要的作用。

影響免疫化學(xué)分析質(zhì)量的根本因素是抗體的特異性與親和性，這些性質(zhì)又決定于免疫半抗原分子的結(jié)構(gòu)，因此免疫半抗原的分子設(shè)計(jì)與合成是產(chǎn)生特異性抗體和建立小分子獸藥殘留快速檢測技術(shù)的最基礎(chǔ)和最關(guān)鍵的步驟。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種萊克多巴胺人工抗原及其制備方法與應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的萊克多巴胺人工抗原是在萊克多巴胺半抗原的基礎(chǔ)上構(gòu)建所得的抗原。

所述萊克多巴胺半抗原屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，其結(jié)構(gòu)如式I所示。

式I

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種制備所述萊克多巴胺半抗原的方法。

本發(fā)明所提供的制備所述萊克多巴胺半抗原的方法，具體可包括如下步驟：將萊克多巴胺、N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺、水合肼按照摩爾比為1：1：5的比例進(jìn)行反應(yīng)，獲得所述化合物。

所述反應(yīng)中，所述萊克多巴胺與所述N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺先在N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，以三乙胺為催化劑進(jìn)行反應(yīng)，獲得反應(yīng)中間體；再將所述中間體與所述水合肼在乙醇中反應(yīng)，獲得所述克多巴胺半抗原。

更加具體的，所述萊克多巴胺半抗原的制備方法如下：向萊克多巴胺的N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中邊攪拌邊加入N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺，萊克多巴胺和N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺摩爾比1：1，再加入三乙胺，100-110℃攪拌回流8-16h值反應(yīng)完全；加少量水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉水洗有機(jī)相，干燥，旋干，薄層色譜純化產(chǎn)物；產(chǎn)物純化后溶于乙醇中，加水合肼（所述萊克多巴胺、所述N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺、所述水合肼的摩爾比為1：1：5）室溫水解24h，反應(yīng)結(jié)束后直接干燥，旋干，得萊克多巴胺半抗原。

利用上述方法制備所述萊克多巴胺半抗原過程中所得到的結(jié)構(gòu)如式II所示的中間體也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

式II

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種制備所述中間體的方法。

本發(fā)明所提供的制備所述中間體的方法，具體可包括如下步驟：將萊克多巴胺、N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺按照摩爾比為1：1的比例進(jìn)行反應(yīng)，獲得所述化合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供在所述萊克多巴胺半抗原的基礎(chǔ)上構(gòu)建得到的萊克多巴胺抗原。

本發(fā)明所提供的萊克多巴胺抗原，為將所述萊克多巴胺半抗原與載體蛋白偶聯(lián)所得的抗原；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述載體蛋白具體為牛血清白蛋白。

所述萊克多巴胺抗原的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

所述萊克多巴胺抗原的制備方法具體可包括如下步驟：將所述萊克多巴胺半抗原與載體蛋白（如牛血清白蛋白）通過酰胺鍵偶聯(lián)，獲得所述萊克多巴胺抗原；

其中，所述萊克多巴胺半抗原與所述牛血清白蛋白偶聯(lián)的摩爾比為12：1。